内容发布更新时间 : 2024/5/2 19:45:02星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
实验五 微生物的计数与活性污泥中生物相观察
一、 实验目的
1、学习平板菌落计数法的基本原理和方法，了解血球计数板的结构和使用方法和分光光度法计数法的原理和方法。 2、学会用血球计数板对芽殖酵母进行计算。
3、学习观察活性污泥中生物相的方法，初步分析生物处理系统工作状态是否正常。
二、 实验原理
1、 平板菌落计数法
平板菌落计数法是将待测样品经适当的稀释后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据稀释倍数和取样接种量即可算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不容易完全分散成单个细胞，所以长成的一个单个菌落也有可能来自样品中的2—3个或者更多细胞。因此平板菌落结果往往偏低。为了清楚阐述平板菌落计数结果，现在已倾向使用菌落形成单位，而不以绝对的菌落数来表示样品的活菌含量。 2、 分光光度法
当光线通过细菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，菌细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列己知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度--菌数标准曲线。然后，以样品液所测得的光密度，从标准曲线中查出对应的菌数。制作标准曲线时，菌体计数可采用血球计数板计数，平板菌落计数或细胞干重测定等方法。 3、 血球计数板法
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板和载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一
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定的（0.1mm3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是或菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。其构造如下图所示。
在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘以16或者25，就得出一个大方格中的总菌数，再换算成1mL菌液中的总菌数。
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4、 活性污泥相观察
活性污泥中的生物相比较复杂，以细菌和原生动物为主，还有真菌、后生动物等。某些细菌能分泌胶粘物质形成菌胶团，进而组成污泥絮绒体（绒粒）。在正常的成熟污泥中，细菌大多集中于菌胶团絮绒体中，游离细菌较少，此时，污泥絮绒体可具有一定形状、结构稠密、扩光率强、沉降性能好。原生动物常作为污水净化指标；当固着型纤毛虫占优势时，一般认为污水处理池运行失常；当后生动物轮虫等大量出现时，意味着污泥极度衰老。
活性污泥的污泥絮粒大、边缘清淅、结构紧密,呈封闭状、具有良好的吸附和沉降性能。絮粒以菌胶团细菌为骨架,穿插生长一些丝状菌,但丝状菌数量远少于菌胶团细菌,未见游离细菌、微型动物以固着类纤毛虫为主,如钟虫、盖纤虫、累枝虫等;还可见到木盾纤虫在絮粒上爬动,偶尔还可看到少量的游动纤毛虫等,轮虫生长活跃。这是运行正常的污水处理设施的活性污泥生物相,表明污泥沉降及凝聚性能较好,它在二沉池能很快和彻底地进行泥水分离,处理出水效果好。在形成这种生物相结构时,应加强运行管理,以继续保持这种运行条件。 5、观察活性污泥生物相的意义。
活性污泥和生物膜是生物法处理废水的主体，污泥中微生物的生长、繁殖、代谢活动以及微生物之间的演替情况往往直接反映了处理状况。因此，我们在操作管理中除了利用物理、化学的手段来测定活性污泥的性质，还可借助于显微镜观察微生物的状况来判断废水处理的运行状况，以便及早发现异常状况，及时采取适当的对策，保证稳定运行，提高处理效果。为了监测微型动物演替变化状况还需要定时进行计数。
三、 实验方案（本实验只做血球计数板法和活性污泥生物相观察）
1、 实验仪器
显微镜，载玻片和盖玻片，酒精灯，无菌吸管，无菌试管，血球计数板，镊子及常用实验用品。 2、 实验材料
活性污泥溶液，芽殖酵母培养液。 3、 实验步骤
（1） 细菌计数（本实验用血球计数板法）
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