内容发布更新时间 : 2024/5/21 15:33:25星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

货号：MS2408 规格：100管/96样

甘油三酯（triglyceride, TG）含量测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 测定原理：

用异丙醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、可调式移液枪、双蒸水 试剂组成和配置：

试剂一：液体60mL×2瓶，4℃保存。 试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。 试剂四：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂五：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂六：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：液体1mL×1支，1mg/mL标准甘油三酯溶液，4℃避光保存。

TG的提取：

1、组织中TG的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即TG待测液。 2、细胞、细菌中TG的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清，即TG待测液。

3、血清（浆）样品：直接测定。

测定操作：

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到420 nm，蒸馏水调零。 2．水浴锅预热到65℃。 双蒸水（μl）1mg/ml标准液（μl）TG待测液（μl）试剂一（μl）试剂二（μl）空白管10//12525标准管/10/12525测定管//1012525 加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡15min，静置，取上层溶液15μL，置于新的Ep管。

3．甘油三酯含量测定：

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上层溶液（μl）试剂三（μl）试剂四（μl）试剂五（μl）试剂六（μl） 待冷却后，置于微量石英比色皿/96孔板测定420nm处吸光值，记为A空，A标和A测。 注意：空白管和标准管只需测定一次。

计算公式：

1. 血清（浆）中甘油三酯含量计算：

TG含量（mg/dL）=C标准品×（A测－A空）÷（A标－A空）×100

=100×（A测－A空）÷（A标－A空）

C标准品：1mg/mL；100mL：血清体积，1dL=100 mL。 2. 组织中甘油三酯含量计算： (1)按样本蛋白浓度计算

TG含量（mg/ mg prot）= C标准品×（A测－A空）÷（A标－A空）÷Cpr

=（A测－A空）÷（A标－A空）÷ Cpr

(2)按样本质量计算

TG含量（mg/ g 鲜重）=C标准品×（A测－A空）÷（A标－A空）÷W

=（A测－A空）÷（A标－A空）÷ W

C标准品：1mg/mL ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g/mL 3. 细胞、细菌中甘油三酯含量计算： TG含量（mg/104 cell）=C标准品×（A测－A空）÷（A标－A空）÷细菌或细胞（104 cell /mL）

4

=（A测－A空）÷（A标－A空）÷细菌或细胞（10 cell /mL）

C标准品：1mg/mL。

注意事项：

1. 试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。 2. 加试剂二后需剧烈震荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取。 3. 最低检出限为100μmol/L。

标准管测定管151550501515充分混匀，65℃水浴3min505050505050充分混匀，65℃水浴15min空白管155015

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