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文件编号： 门冬氨酸胺基转移酶测定 1 检测原理 版本号： 页码：第 页 共 页 门冬氨酸氨基转移酶（AST）催化L-门冬氨酸转氨基到α-酮戊二酸（α-KG）形成L-谷氨酸和草酰乙酸。形成的草酰乙酸被苹果酸脱氢酶（MDH）还原成苹果酸，同时对还原型的烟酰胺-腺嘌呤二核苷酸（NADH）进行氧化。 L-丙氨酸 +α-KG AST L-谷氨酸 + 草酰乙酸 PH7.8 草酰乙酸+ NADH（H） MDH 苹果酸 + NAD 2 标本采集与处理 2.1 采血方法 空腹采不抗凝静脉血2~3ml。 2.2 标本保存 室温保存，及时送检。 2.3 注意事项 推荐选用血清。标本采集后尽快分离血清，避免溶血。避免剧烈的体力劳动后采集标本，因骨骼肌细胞通透性增加，酶活力也增加。标本应避免脂血、溶血、黄疸。 3 试剂和设备 3.1 试剂 采用西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供的试剂盒。 3.1.1试剂组成 试剂船1~3孔为MDH3000U/L，乳酸脱氢酶900U/L，NADH0.21mmol/L，片剂；1-3孔为P5P0.18 mmol/L，缓冲液，片剂；4~6孔为门冬氨酸180mmol/L，α-酮戊二酸11.5 mmol/L，片剂。 3.1.2 试剂准备 直接使用。 3.1.3 试剂保存 试剂2~8℃保存，有效期内稳定。 3.2 质控品 美国BIORAD液体多项质控品。 3.3 校准品 西门子校准品。 3.4 仪器 ++文件编号： 门冬氨酸胺基转移酶测定 版本号： 页码：第 页 共 页 SIEMENS DIMENSION Xpand Plus/RxL Max全自动生化分析系统。 4 操作程序 4.1 检测过程流程 签收样品 → 离心 → 上机检测 → 审核报告 → 签发报告 → 标本保存。 4.2 样品签收 严格按照标本接收程序签收标本。 4.3 标本处理 以2500~3000r/min,离心6~10min，分离血清上机测定。如不能及时检测，分离血清于2-8℃保存。 4.4 标本检测 4.4.1 手工编排测试项目：样品按编号装入样品架，主屏幕按F1:ENTER DATA，在Position处输入样品所在样品架字母及所在位置号，按enter，在Patient Name处选择性输入病人名字，按enter，在Sample No处输入样品号，按enter，在Tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目，根据需要选择相应的按键改变Mode（按F7:MEXT MODE选择样品管类型）、Priority（按F4:NEXT PRIORITY选择样品的处理模式）、Fluid（按F8:NEXT FLUID选择标本类型）。 4.4.2 双向条形码标本分离血清后直接运行仪器。 4.4.3 运行：输入完毕后按F3:LOAD LIST，确认样品已经装载在样本盘上，按Run键，仪器开始进行样品检测。 4.4.4 检验后标本保存 标本检验完成后用采血管原盖盖紧，保存于标本冷藏库内，按日期放好，保存期为7天。 5 校准程序 5.1 校准品准备和储存 直接使用，2~8℃保存。 5.2 校准条件 在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。 5.3 校准程序 主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1: CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator Product和批号Lot，以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position，最后把校准液各个水平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按F4：ASSIGN CUPS指定样品杯，校准液按顺序排列在样品架上，按F7：LOAD/RUN→F4：RUN或“RUN”运行键运行校准程序。 6 质量控制程序 文件编号： 门冬氨酸胺基转移酶测定 6.1质控品准备和储存 版本号： 页码：第 页 共 页 质控品为液体，可以直接使用。原包装质控品-10~-70℃可保存到瓶身有效期，未开启2~8℃可保存90d,开启后2~8℃可保存30d 。 6.2 质控水平和分析批长度 每24小至少进行一批，每批2个浓度水平。 6.3 质控操作程序 与4.4标本检测步骤相同，只需要按F4:NEXT PRIORITY将ROUTINE修改成QC状态。 7 性能参数 本法线性范围为0 ~ 1000U/L,对于超过测定线性范围的结果，用酶稀释液对标本进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。 8 生物参考区间 15 ~ 37U/L。 9 临床意义 谷草转氨酶广泛存在于心肌、肝和骨骼肌，其中心肌含量最高，心肌梗死后6～12h开始增高，16～48h达到高峰，2～6d后恢复正常。各种急性肝炎、中毒性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌、胸膜炎、肾炎、肺炎等也可引起轻度增高。正常人AST/ALT比值为1.15。肝炎时，AST和ALT一样明显升高，急性期由于ALT清除率较慢，往往ALT大于AST。恢复时也是ALT较慢，AST/ALT比值小于1。如转氨酶升高且AST/ALT比值大于1常说明有慢性肝炎的可能。肝硬化时AST/ALT比值明显升高（>3）。 10 参考文献 [1] 西门子医学诊断产品（上海）有限公司门冬氨酸胺基转移酶（AST）测定试剂说明书。 [2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006：406~410。 编写： 审核： 批准：