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全国艾滋病检测技术规范

3.1.2 HIV-1感染补充试验及急性期和晚期感染者的诊断

核酸检测作为补充实验可用于HIV-1感染诊断，包括抗体复检试验有反应和抗体补充试验不确定样本的判定；急性期和晚期感染者的诊断。 对于急性期感染和晚期的诊断需结合流行病学史、临床症状以及其他相关实验室检测指标（如CD4+T淋巴细胞计数等）。此外，对HIV抗体阴性的高危人群样品以及采供血机构的原料血浆进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低“残余危险度”，减少二代传播。

核酸检测结果低于最低检测限不能排除HIV-1感染。 3.2治疗效果监测

艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1核酸定量检测，可判断抗病毒药物治疗的治疗效果。病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。通常在治疗一个月后病毒载量降低0.5log以上才被认为临床治疗有效，六个月后应降到小于检测限（详见我国艾滋病抗病毒药物治疗手册）。 3.3病程监控及预测

HIV感染者体内病毒载量的变化具有一定规律，这种变化与疾病的进程密切相关。对未进行抗病毒药物治疗的感染者定期进行病毒定量检测，可监测病程变化，定期进行HIV 病毒载量检测有助于确定疾病发展的阶段。

3.4 耐药性监测

可用于HIV耐药检测和监测，指导公共卫生医生了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床医生判断病人的抗病毒药物治疗效果和修改抗病

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毒药物治疗方案。

4 HIV核酸检测实验室要求

HIV核酸检测应在合适的实验室中进行，应制定严格的管理制度和建立与实验和实验室管理相关的标准操作指导书，实验人员必须充分了解各项规定并严格遵照执行。核酸定性、定量检测要严格满足分子生物学和PCR扩增实验室的要求。 4.1 实验室的设计及工作基本原则

HIV核酸检测实验室设计及实验室的基本工作原则应参照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》附件中“医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则”和《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》的要求进行。

4.2 实验室人员和要求

进行HIV核酸检测的人员须具有艾滋病核酸检测的上岗资格，接受过省、市级以上的实验操作技术培训及厂家的培训，并接受实验室生物安全培训。

4.3 实验室生物安全

实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。

5 HIV-1核酸检测方法及程序 5.1 HIV-1核酸定性检测 5.1.1 适应范围

（1）诊断婴儿早期感染：见第六章中“婴儿HIV-1感染早期诊断相关的

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检测策略及结果报告”。

（2） 诊断急性HIV-1感染。针对对HIV-1抗体筛查阴性、近期有流行病学史的个体,或确证结果不确定的样本,核酸定性检测可用于诊断HIV-1急性期感染。

（3） 确定艾滋病病毒感染。针对HIV-1抗体筛查阳性或确证结果不确定的个体，结合流行病学史和临床病史，核酸定性检测可用于HIV-1感染诊断。艾滋病晚期患者可能出现HIV抗体反应不确定，可根据HIV核酸定性检测结果，结合临床病史和CD4+T淋巴细胞计数等情况，进行综合判断，确定临床诊断。

5.1.2 方法：血浆、血清、组织器官或血液制品等可用于检测HIV-1RNA和DNA。DBS可用于检测RNA/DNA。全球目前正式用于临床诊断HIV-1急性期感染的核酸检测试剂比较少，主要是美国FDA批准的Gen-Probe公司生产的Aptima HIV-1 RNA核酸定性检测试剂和欧盟批准的Abbott M2000HIV-1 RNA/DNA定性检测试剂。前者检测原理为转录介导等温扩增（TMA）和化学发光标记探针杂交检测，检测靶基因为HIV-1 LTR和多聚酶基因；后者检测原理为Taqman实时荧光PCR扩增检测，检测靶基因为多聚酶区整合酶基因。国内生产的用于血浆及其血液制品筛查的核酸检测试剂主要为Taqman实时荧光PCR检测试剂。

5.1.3 试剂：必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。

5.1.4 结果判定与报告：检测结果显示“有反应”或“检测到”，报告本次实验核酸阳性；检测结果显示“无反应”或“未检测到”，报告本次

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实验核酸阴性。核酸定性检测值低于最低检测限的结果，不能排除HIV-1感染，需根据流行病学史、临床病史和实验室相关指标进行综合判断。

目前国内外没有商品化的HIV-2核酸检测试剂。 5.2 HIV核酸定量检测 5.2.1 适用范围

（1）监测抗病毒药物治疗效果。抗病毒药物治疗前后，定期病毒载量分析和监测，结合CD4+T淋巴细胞计数，有助于抗病毒药物治疗方案的确定和修改。

（2）监测疾病进展。定期检测HIV-1病毒载量，有助于监测感染者和病人的病程变化，结合CD4+T淋巴细胞计数，为抗病毒药物治疗提供病毒学依据。

（3）诊断急性HIV-1感染。针对HIV-1抗体筛查阴性、近期有流行病学史的个体，或确证结果不确定，核酸定量检测可用于诊断HIV-1急性期感染。

（4）确定HIV-1感染。针对HIV-1抗体筛查阳性或确证结果不确定的个体，结合流行病、和临床病史和CD4+T淋巴细胞计数等，使用核酸定量检测帮助确定HIV-1感染。 5.2.2 方法

HIV-1核酸定量检测原理主要基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增两种方法。靶核酸扩增检测试剂包括Taqman荧光实时定量RT-PCR扩增试剂（Roche CobasTaqMan v2.0和Abbott RealTime HIV-1）和分子信标实时荧光定量RT-PCR靶核酸扩增试剂（NucliSENS EasyQ? HIV-1 v2.0）；

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信号放大扩增系统包括分枝链DNA杂交扩增试剂（Versant HIV-1 RNA bDNA 3.0）。我国实验室常用国内外生产的实时荧光定量RT-PCR靶核酸扩增试剂（荧光探针法）。尽管目前国内外生产的HIV-1核酸定量检测试剂在检测中需要的样本量不同（0.1mL-1mL），但均能在检测线性范围内准确地检测到1000c/ml HIV-1，有助于早期判断治疗失败、可定向实施依从性干预，确保抗病毒药物治疗效果。国内外定量检测试剂检测结果的报告单位，多为每毫升血中病毒的拷贝数（CPs/ml）。拷贝数与国际单位之间的转换可参照各检测试剂的说明或相关研究文献。目前没有商品化HIV-2定量检测试剂。 5.2.3 试剂

必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。 5.2.4 结果判定与报告

按照试剂盒说明书判定结果。

5.2.4.1 用于治疗效果和病程监测：检测值小于试剂盒线性范围下限，报告低于检测限，检测值大于等于试剂盒线性范围下限，按照检测值报告。

5.2.4.2 用于HIV-1感染的诊断：检测值>5000 CPs/ml(或IUs/ml)，报告检测值；检测值≤5000 CPs/ml(或IUs/ml)，尽快再次严格按核酸检测的要求采样检测，报告检测值，结果>5000 CPs/ml(或IUs/ml)，报告检测值，结果仍≤5000 CPs/ml，则需充分结合流行病学史、临床病史、CD4+T淋巴细胞计数和HIV-1抗体随访检测结果等进行综合判断。检测值低于最

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