内容发布更新时间 : 2024/12/29 22:50:22星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
答：二甲氨基萘磺酰氯简称DNS-Cl，可与氨基酸的游离氨基结合成DNS-氨基酸，混合氨基酸随流动相通过聚酰胺薄膜时,待分离氨基酸与聚酰胺薄膜形成氢键.由于各种氨基酸形成氢键的能力强弱不同,因此决定了各待分离氨基酸吸附力的差异,吸附力强展层速度较慢,吸附力弱展层速度较快。同时展层溶剂与待分离氨基酸在聚酰胺粒子表面竞争形成氢键,选择适当的展层溶剂,就可使待分离氨基酸在溶剂与聚酰胺薄膜表面之间分配系数产生最大的差异。一般讲,易溶于展层溶剂的物质所受到的动力作用大,展层速度快,反之速度就慢。这样通过各物质的吸附力和分配系数不同,使得被分离的物质在聚酰胺薄膜层析中的到分离。
组织DNA提取、聚合酶链反应（PCR）
一、名词解释 聚合酶链反应：聚合酶链(PCR)技术是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法.又称无细胞克隆技术.不通过活细胞，操作简便，在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107～108倍，大大提高了DNA的得率。 二、单选题
1.某人提取DNA后，将DNA溶液稀释10倍，然后经紫外分光光度计检测结果为A260nm=0.44，A280nm=0.25，比色皿光径1cm，该DNA样品的浓度为：（ D ） A. 250μg/ml B.132μg/ml C.176μg/ml D.220μg/ml
2.下列几种DNA分子的碱基组成比例各不相同，哪一种DNA的Tm较低？（ D ） A. DNA中A-T占 15% B. DNA中G-C占 25% C. DNA中G-C占40% D. DNA中A-T占80% 3.PCR反应中不需要哪种物质？（ C ） A．Mg2+ B.引物 C.RNA酶 D.DNA聚合酶 4. PCR反应中需要哪酶？（ D ） A.蛋白酶 B.限制性内切酶 C.溶菌酶 D.Taq DNA聚合酶
5.为制备完整的人体细胞DNA，处理样品时不可（ A ）
A. 剧烈震荡 B. 将蛋白质除净 C. 将多糖除净 D. 加核酸酶抑制剂 6.提取DNA的原则除外的是：（ B ）
A.保证核酸一级结构完整性 B.保留所有核酸分子
C.核酸样品中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子 D.蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度 7.下列关于DNA变性的叙述哪一项是正确的？（ D ）
A. 升高温度是变性的唯一原因B. DNA热变性是一种渐进过程，无明显分界线 C. 核酸变性是DNA的独有现象，RNA无此现象
D. 凡引起DNA两股互补链间氢键断裂的因素，都可使其变性 8.组织DNA提取中，苯酚-氯仿抽提离心分三层，DNA位于：（ A ）
A.上层 B.中间层 C.下层 D.上下层均有
9.组织DNA提取中，苯酚-氯仿抽提离心分三层，变性蛋白质位于：（ B ）
A.上层 B.中间层 C.下层 D.上下层均有 10.有关DNA变性（ C ）
A．DNA链的断裂引起 B. 核苷酸之间磷酸二酯键的断裂 C.维持双螺旋稳定的氢键的断裂 D.DNA变性后分子量降低 E. 变性后使DNA一级结构改变
11.有关Tm值描述不正确的是（ A ）
A．加热使DNA变性时，在260nm吸收最高的值是Tm值 B. Tm时，核酸分子内50%的双螺旋结构破坏
C. 核酸分子的Tm值与其G+C与总碱基的百分比成正相关 D.典型的DNA变性曲线为S型
E. DNA变性是在一个很窄的范围内发生的 12.有关退火的描述正确的是（ B ）
A．热变性DNA经速冷即可复性 B. 热变性DNA经缓冷即可复性
C. DNA复性仅受温度影响 D. DNA复性受时间的影响 E. DNA复性仅受其浓度影响 13.DNA分子变性时（ A ）
A.G+C比例越高，Tm值也越高 B. A+T比例越高，Tm值也越高 C. Tm=（A+T）+（G+C） D. DNA分子越长，Tm值也越高 E. 双链DNA解链并断裂
14.组织DNA提取中，异戊醇的作用是：（ C ）
A.抑制DNase B.沉淀DNA C.减少液体表面张力 D.抑制RNase 三、问答题
1．组织DNA提取的基本原理是什么？
答：DNA在生物组织中往往以核蛋白的形式存在于细胞核中，分子量颇大，故在提取DNA时最根本的要求是保持DNA大分子的完整性及纯度，所以提取过程中要避免机械剪切引起DNA分子降解，另需注意对杂质及蛋白质的去除以及防止细胞内存在的DNA酶对DNA的酶解。组织DNA提取的基本原理是SDS存在的条件下，裂解细胞，使核蛋白解聚并使细胞内存在的DNA 酶失活，并通过用酚-氯仿多次抽提后，用乙醇沉淀得到纯化的DNA。 2．组织DNA提取用到哪些试剂，其主要作用是什么？
答：裂解液：裂解细胞，抑制DNA酶活性；苯酚-氯仿：蛋白变性剂；氯仿-异戊醇：降低分子表面张力,减少抽提过程中泡沫的产生;同时异戊醇有助于分相；5mol/L NaCl：使DNA沉淀；冰无水乙醇使DNA从DNA水溶液中沉淀出来；70%乙醇：洗涤DNA,去除残余的盐离子；TE缓冲液：溶解并保存DNA。 3．什么是PCR，其基本原理是什么？
答：即聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR），是一种体外快速扩增特异性DNA片段的技术。PCR反应体系中含有模板DNA、引物、Mg2+、4种脱氧核糖核苷酸（dNTP）和Taq DNA聚合酶，在高温94℃下变性，使双链模板解链为两条单链，再在退火温度下使引物与模板DNA形成部分双链DNA，然后在72℃下，通过Taq DNA 聚合酶使引物从5＇端向3＇端延伸，随着4种dNTP的掺入合成新的DNA互补链，完成第一轮变性、退火和延伸反应循环，由于每一轮循环扩增的产物可作为下一轮扩增反应的模板，因此，理论上每一轮循环可使DNA数量增加一倍。反复25~30次，特异DNA序列片段以指数方式可扩增106倍以上。
4．如何计算提取得到的DNA浓度？
答：DNA浓度(μg/ml)= A260nm×50×稀释倍数×1/光径 DNA得量(μg) = DNA浓度×最终DNA原液毫升数。 5．组织DNA提取有哪些操作注意事项？
答：尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏；减少化学因素对核酸的降解,操作多在pH4～10条件下进行；减少物理因素对核酸的降解,主要是机械剪切力、高温对核酸的破坏；防止核酸的生物降解,主要是细胞内和外来的各种核酸酶对核酸的破坏。