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重组蛋白GGH的分离纯化及药效学初步评价

Purification of GGH Fusion Protein and Preliminary Evaluation

of Pharmacodynamical

微生物与生化药学， 2011， 硕士

【摘要】 胰高血糖素样肽-1由肠道L细胞合成和分泌的一个30个氨基酸的多肽,它不仅能刺激胰岛β细胞增殖、抑制β细胞凋亡,而且延缓胃排空和抑制食欲。但其在体内的半衰期只有26 min,大大限制了其应用。为克服GLP-1半衰期短的缺点,实现其在体内的长效作用,本实验室成功构建了胰高血糖素样多肽-1（GLP-1）与人血清白蛋白的融合体（GGH）,本文对表达成功的融合蛋白GGH进行分离纯化的优化和药效学初步评价,主要结论如下:融合蛋白GGH分离纯化步骤:发酵液8000 r/min离心8 min,0.65μm的微滤膜微滤,采用截留分子量为10 kDa的超滤膜超滤20倍,依次经过Blue Sepharose 6 Fast Flow、Phenyl Sepharose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow、Sephadex G-25层析柱,得到的目的蛋白经过HPLC和SDS-PAGE检测纯度达到98.48%以上,回收率为28.9%,内毒素含量10 EU/mg。口服糖耐量实验,评价融合蛋白GGH的最小有效量、最大剂量的耐受性、静脉注射给药时的量-效关系,皮下注射给药... 更多还原

【Abstract】 Glucagon-like peptide-1 （GLP-1） is 30-residual peptide hormone secreted by intestinal L-cells. It can not only

stimulate pancreatic beta cells proliferation but also inhibit pancreatic beta cells apoptosis; including inhibition of both gastric empting and food intake. Its half-life in circulation is very short and provided mainly by fast renal clearance due to its low molecular weight and proteolysis susceptibility, resulting in low clinical utility. In our lab, A GLP-1 fusion protein named GGH ... 更多还原

【关键词】 GLP-1； 融合蛋白GGH； 分离纯化； 药效学； 【Key words】 GLP-1； Fusion protein； purification process； pharmacodynamical； 摘要 3-4 Abstract 4 第一章 绪论 8-18

1.1 糖尿病的发病机理及治疗策略 8-9 1.1.1 糖尿病的发病机理 8 1.1.2 糖尿病的治疗策略 8-9 1.2 GLP-1 生理功能 9-11

1.2.1 GLP-1 对胰岛功能的影响 9-10

1.2.2 GLP-1 刺激胰岛素分泌和增加胰岛素的敏感性 10-11

1.2.3 GLP-1 抑制胰高血糖素的分泌 11

1.2.4 GLP-1 降低外周血糖 11

1.2.5 GLP-1 对食欲和胃排空的作用 11 1.3 GLP-1 的长效性研究 11-12

1.4 重组人血清白蛋白的分离纯化方法 12-14 1.4.1 重组人血清白蛋白的粗分离阶段 13 1.4.2 重组人血清白蛋白的精细分离阶段 13-14 1.4.3 重组人血清白蛋白纯化的发展趋势 14 1.4.4 重组蛋白GGH 纯化工艺进展 14 1.5 糖尿病动物模型 14-15

1.5.1 化学药物诱导的动物模型 15 1.6 本课题研究的意义和内容 15-18 1.6.1 本课题研究的意义 15 1.6.2 本课题的研究内容 15-18 第二章 融合蛋白GGH 的分离纯化 18-32 2.1 引言 18

2.2 材料与方法 18-22 2.2.1 材料和试剂 18-19 2.2.2 主要仪器 19 2.2.3 分离纯化方法 19-21 2.2.4 纯度检测方法 21-22 2.3 结果与讨论 22-30 2.3.1 超滤浓缩 22