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第八讲 单链噬菌体载体及噬菌粒载体

吴 乃 虎

中国科学院遗传与发育生物学研究所

第八讲 单链噬菌体载体及噬菌粒载体

一、单链噬菌体的一般生物学 1． 单链噬菌体的优越性 2． M13噬菌体的生物学特性 二、M13克隆体系 1． M13克隆体系 2． M13克隆体系

-半乳糖苷酶的显色反应原理

3． M13载体系列的发展 4． M13载体系列的优点 三、噬菌体展示载体

1． 噬菌体展示载体的构建原理 2． 噬菌体展示载体 3． 噬菌体表面展示文库

4． 应用噬菌体展示载体分离有关蛋白质的实例 四、噬菌粒载体

1． M13噬菌体载体克隆的若干难点 2． 噬菌粒

3． 若干常用的噬菌粒载体 4． pBluescript噬菌粒载体 5． pUC118和pUC119噬菌粒载体

第八讲 单链噬菌体载体

一、单链噬菌体一般生物学

大肠杆菌丝状单链DNA噬菌体有M13噬菌体、f1噬菌体及fd噬菌体，它们均含有分子量约为6400个核苷酸的单链闭环DNA分子。

1．单链DNA phage的优越性

A． 具有双链的复制型DNA(RF DNA)，可如质粒质粒一样进行

遗传操作；RF DNA：Replication Form DNA。

B． RF DNA和ssDNA均可感染感受态的寄主细胞——形成

phaque或colony。

C． 不受包装的限制。因为单链DNA phage的大小是受其DNA

多寡制约的。

D． 可容易地测出外源DNA的插入取向。

E． 可产生大量的含有外源DNA的单链DNA分子，这种单链

DNA分子有如下用途(作为模板)： *1用作双脱氧链终止法进行DNA测序