内容发布更新时间 : 2024/5/18 12:31:29星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

反相高效液相色谱法测定绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁和槲皮素的含量

作者：卢金清， 喻樊， 田耀平， 肖波， 陈黎， 徐玉婷， 詹晓莲

【关键词】 绞股蓝50%总皂苷提取物；,,芦丁；,,槲皮素；,,反相高效液相色谱法,

摘要：目的建立绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁与槲皮素的含量测定 方法 。方法采用高效液相色谱仪，使用TURNER KromasilTMC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.4%磷酸水溶液甲醇乙腈进行梯度洗脱，流速为0.5 ml?min-1，检测波长为360 nm；柱温为40℃。结果芦丁在

0.37~3.70 μg范围内有良好的线性关系，r=0.999 9。槲皮素在0.05~0.50 μg范围内有良好的线性关系，r= 0.999 9；芦丁的平均加样回收率为99.2%，RSD为1.69%；槲皮素的平均加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。结论该方法简便快捷，准确度高。

关键词：绞股蓝50%总皂苷提取物； 芦丁； 槲皮素； 反相高效液相色谱法

Determination of Rutin and Quercetin in 50% Total Gypenoside Extraction of Gynostemma by RPHPLC

Abstract：ObjectiveTo determine the main flavonoids rutin and quercetin in 50% total saponins of Gynostemma by RPHPLC. Methods The separation was performed on TURNER KromasilTMC18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase consisted of 0.4% phosphoric acid- methanol-acetonitrile，with the following rate of 0.5 ml?min-1at 40℃，the wavelength for measurement was 360 nm.ResultsThe calibration curves were linear in the range of 0.37~3.70 μg for rutin (r=0.999 9)and in the range of 0.05~0.50 μg for quercetin (r=0.999 9).The average recovery of compound rutin was 99.2%(RSD=1.69%),and that of compound quercetin was 99.1%

(RSD=2.21%).ConclusionThis method is accurate and reproducible. Key words：50% Total saponins of Gynostemma; Rutin; Quercetin; RPHPLC

绞股蓝(Gynostemma)又名七叶胆，是葫芦科绞股蓝属植物。该属植物我国有14种和3变种［1］。 现代 药 理学 证明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用［2］。绞股蓝50%总皂苷提取物是总皂苷含量达50%的、一种适用于口服制剂生产的原料药，它具有很广的 应用 范围，故本文采用反相高效液相色谱法，可对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦丁、槲皮素等成分进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，能为建立绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供依据。 1 仪器与试药

DIONEXP680高效液相色谱仪（四元泵、Chromeleon色谱工作站、UVD170U检测器），AT201 电子 分析 天平（d=0.01 mg，瑞士），芦丁对照品（ 中国 药品生物制品检定所，批号0080－9705）、槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号081－9003）；甲醇（色谱纯，天津大茂化学仪器供应

站）、乙腈（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站），其它试剂均为分析纯，水为双蒸水。绞股蓝原50%总皂苷提取物由湖北中医学院中药制剂教研室提供。 2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为TURNER KromasilTM（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.4%磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C；按表1进行梯度洗脱，检测波长为360 nm；流速为0.5 ml?min-1，柱温为40℃。 理论 板数按芦丁、槲皮素峰 计算 应不低于3 000。色谱图见图1~4。 表1 梯度洗脱（略）

图1 芦丁对照品HPLC图谱（略） 图2 槲皮素对照品HPLC图谱（略）

图3 绞股蓝50%总皂苷提取物供试品的HPLC图谱（略） 图4 空白溶剂图谱（略）

2.2 供试品溶液的制备 取本品0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，精密量取20 ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.368 mg的溶液，即得芦丁对照品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.054 8 mg的溶液，即得槲皮素对照品溶液。

2.4 标准曲线的制备分别精密吸取芦丁、槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，结果见表1，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得芦丁的回归方程为：y = 61.194 5x + 1.100 4，r=0.999 9；槲皮素的回归方程为：y = 129.036 0X－0.833 4，r=0.999 9。线性范围：芦丁为0.37~3.70 μg；槲皮素为0.05~0.50 μg。

图5 芦丁标准曲线（略） 图6 槲皮素标准曲线（略）

2.5 精密度实验 取2.3项下芦丁和槲皮素对照品溶液各5 μl，分别连续进样5次，测定峰面积，结果见表2～3。芦丁和槲皮素的RSD分别为：0.08%和0.26%。

表2 芦丁精密度实验结果（略） 表3 槲皮素精密度实验结果（略）

2.6 稳定性实验 取2.2项下样品溶液室温放置0，3，6，9，12，24 h后测定，结果见表4~5，测得芦丁和槲皮素峰面积基本不变，RSD分别为1.77%，2.80%，表明样品溶液在24h之内稳定。 表4 芦丁稳定性实验结果（略） 表5 槲皮素稳定性实验结果（略）

2.7 重复性实验 取同一批样品5份，照2.2项下的 方法 依法制备，测定样品中芦丁和槲皮素的含量，结果见表6~7。测得芦丁和槲皮素含量的分别为0.955%和0.222%，RSD分别为1.29%和1.71%。

2.8 加样回收实验 取已知含量的本品粉末6份，每份0.1 g，精密称定，分别加入一定量的芦丁、槲皮素对照品，按2.2项下的方法依法制备，按上述色谱条件进行测定，结果见表8~9。芦丁加样回收率为99.6%，RSD为1.07%，槲皮素加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。

2.9 样品测定 按2.2项下方法配制样品溶液5份，依法测定，结果见表10。

表6 芦丁重复性实验结果（略） 表7 槲皮素重复性实验结果（略） 表8 芦丁加样回收实验结果（略） 表9 槲皮素加样回收试验结果（略）

表10 5批绞股蓝药材中芦丁、槲皮素含量测定结果（略） 3 讨论

3.1 提取方法的选择 在绞股蓝原药材芦丁、槲皮素的含量测定中，我们曾对不同极性的提取溶剂（如：不同浓度的甲醇、不同浓度的乙醇）和不同的提取方式（如：超声、回流等）进行过考察，并对提取时间进行了单因素实验，综合考虑以石油醚回流提取，除去脂溶性较大的成分，再以甲醇回流提取3 h实际工资效果最好。

3.2 检测波长的选择 在检测波长选择中根据对芦丁对照品、槲皮素对照品溶液紫外光谱的测定，在360 nm处有最大吸收，最终选择测定波长为360 nm。

3.3 流动相的选择流动相的选择曾使用过乙腈-水、乙腈-甲醇-水、甲醇-水、乙腈-0.4%磷酸等流动相进行等度及梯度洗脱，由于干扰峰难以分离，最后根据分离情况选择了表1中的流动相。绞股蓝50%总皂苷提取物色谱图中除芦丁、槲皮素的色谱峰外还有其他的色谱峰，分离度也较好，亦可以作为指纹图谱用于绞股蓝50%总皂苷提取物的鉴别。经方法学验证，此方法能对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦丁、槲皮素进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，为建立适用于口服制剂的绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供了 科学 的依据。 参考 文献 ：

［1］ 丁树利,朱兆仪,李 勇.绞股蓝及同属植物的生药学 研究 ［J］. 中国 药学杂志,1994,29(2)：79.

［2］ 杨 静.绞股蓝化学成分研究［J］.陕西中医，2000,21 (8)：377.