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动物免疫学实验指导

第二版

徐春厚 谢为天 雍艳红 编 动物医学 生物技术专业用

广东海洋大学教材科出版 二00七年二月二十八日

目 录

实验一实验二实验三实验四实验五实验六实验七实验八实验九实验十

凝集试验?????????????????????1 沉淀试验?????????????????????4 溶血试验?????????????????????8 病毒的血凝及血凝抑制试验 ????????????10 玫瑰花环试验 ?????????????????13 玫瑰花环试验 ?????????????????15 玫瑰花环试验?????????????????17 酶联免疫吸附试验 ????????????????18 荧光抗体技术 ??????????????????20 多克隆抗体（免疫血清）的制备 ??????????22

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E- EA EAC 实验一 凝集试验

颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。

细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。

凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。 [目的要求]

1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。 2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。

3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。 [材料与试剂]

1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。

2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。

3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。

4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。 [实验内容及操作方法]

（一）试管凝集试验

以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。

1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。如被检血清有多份，对照只需做1份。

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