内容发布更新时间 : 2024/11/20 17:27:03星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

C 3 ～5倍 D 5～8倍 E 10倍以上

39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( ) A ssDNA B 1×SSC C 10×SSC D 5×TBEC E 50×TAE

40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( ) A 4个 B 6个 C 8个 D 10个 E 12个 【X型题】

41．下列哪些是影响DNA复性的因素( ) A DNA浓度 B DNA的分子量 C 温度 D 碱基组成 E DNA的来源

42． DNA探针的优点有（ ） A 制备方法简单 B DNA探针易降解

C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择

D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽 E 单链，不存在竞争性的自身复性

43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（ ） A DNA加尾法

B DNA切口平移标记法 C 随机引物标记法 D 末端标记

E 尾端标记

44．关于DNA变性的描述正确的是( ) A 二级结构破 B 一级结构破坏 C 黏度降低 D 生物活性丧失 E 浮力密度增加

45．以下哪些因素可以使DNA变性（ ） A 增加溶液的浓度 B 加热

C 改变溶液的pH值 D 有机溶剂 E 冷藏

46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( ) A ssDNA B BSA

C 小牛胸腺DNA D 脱脂奶粉 E DTT

47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（ ）A 粘度下降 B 沉降速度增加 C 浮力下降 D 紫外光吸收增加 E 紫外光吸收减少

48.下列物质适于非放射性探针标记的是( ) A AKP B ACP

C 生物素 D 地高辛 E 荧光素

49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( ) A 特异性高

B 可依赖氨基酸序列推测其序列

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C 分子量小

D 可用于相似基因顺序差异性分析 E 可用末端转移酶进行5′端标记

50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（ ） 55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（ ） A 预杂交 B 杂交 A 采用大片段探针 B 少量的反应体积 C 高反应温度 D 不断的振摇 E 大量的反应体积

51．关于切口平移法下述正确的是( ) A 可标记线性DNA B 可标记松散螺旋DNA C 可标记超螺旋DNA D 可标记存在缺口的双链DNA E 可标记随机引物

52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（A 毛细转移 B 真空转移 C 负压转移 D 电泳转移 E 冷冻转移

53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( ) A 可标记单链DNA B 可标记双链RNA C 可标记单链RNA

D 比活性高达108cpm／μg DNA以上 E 常经过SephadexG-50纯化才可使用 54．可以采用哪些方法来标记探针（ ） A 杂交标记法 B 切口平移标记法 C 5’-末端的标记 D 3’-末端的标记

E 化学法延长标记

C 洗脱 D 固定 E 转移

56．放射自显影可以被分为（ ） A 直接放射自显影 B 氧化显影 C 封闭显影 D 间接放射自显影 E 固定显影

57．关于电转移下列描述正确的是( ) A 快速、高效 B 需要特殊设备 C 缓冲液用TAE或TBE D 可产生高温 E 常用NC膜作为支持介质 58．预杂交的主要目的是（ ） A 平衡滤膜

B 封闭非特异性杂交的位置 C 提高杂交信号的检测效率 D 便于从滤膜上除去探针

E 清除用于杂交反应检测的显色物质

59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )

A 对人体危害小 B 需要特殊设备 C 可长时间使用 D 灵敏度不如放射性探针 E 重新杂交新探比较容易

60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺

失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致

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）限制性片段长度改变。可以通过哪些方法检测（ ） A PCR扩增 B RAPD

C Southerm印迹杂交 D Northern印迹杂交 E 以上都不是 1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？

2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围 3．试述Northern blot杂交的操作步骤？ 4．什么是肽核酸？并简述其应用？

5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方

61．重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（ ） A 菌落印迹杂交 B Northern印迹杂交 C Western印迹杂交 D 原位杂交 E 斑点杂交

62．关于RNA探针的描述下列正确的是( ) A 可用于随机引物标记 B 特异性高 C 灵敏度高

D 可用非同位素标记法标记 E 不易降解

63．下列哪些可以作为核酸探针使用（ ） A microRNA B 单链DNA C 寡核苷酸 D mRNA E 双链RNA

64．关于核酸探针的描述下列正确的是( ) A 可以是DNA B 可以是RNA C 可用放射性标记 D 可用非放射性标记 E 必须是单链核酸 （三）问答题

面的应用。

6．请叙述杂交探针标记方法的种类。 7．简述直接放射自显影的原理。

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参考答案

（一） 名词解释

1．原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内基因定位或基因表达的检测技术。

2．核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。利用核酸分子杂交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。 3．探针：是一段单链或双链核苷酸，用放射性核素或非放射性物质标记其末端或全链，可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交，以探测它们的同源程度。这一段标记的核苷酸被称为探针。

4．反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样品DNA又互不干扰，故能一次性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一个未知序列。

5．缺口平移标记法：该法是利用低浓度DNase I在DNA双链上随机切开若干个切口，然后利用E. coli DNA聚合酶I的5’?3’外切酶活性和5’ ?3’聚合酶活性，使DNA链上的核苷酸不断被切除，而带放射性核素标记的dNTP不断地被填入缺口位置，从而形成两条链被均匀标记的高放射活性的探针。

6．随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺DNA的DNase I降解物。随机引物在较低的

退火温度下，能与各种单链DNA模板结合。首先使双链DNA分子变性成为单链，然后退火使随机引物结合于两条单链模板上，当反应液中存在的4种dNTP中有一种带放射性核素标记时，在DNA聚合酶催化下合成新的带标记的DNA链。反应结束后经纯化即可得到标记的DNA探针。 7．末端标记法：寡核苷酸探针由于较其他类型的探针短，需要采用末端标记法。该法需要DNA分子的末端带有羟基，而人工合成寡核苷酸的5’端本身即为羟基。其原理是利用多核苷酸激酶将[?-32P] ATP分子上7位磷酸基转移至寡核苷酸链的5’末端，末端标记也可在3’端进行。

8．Southern blot杂交：是研究DNA图谱的基本技术，在遗传诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。Southern印迹杂交的方法是将标本DNA用限制性内切酶消化后，经琼脂糖电泳分离各酶切片段，接着，使酶切片段DNA发生变性并转印到一固相支持物 (通常是硝酸纤维素薄膜或尼龙膜)上，经固定后和标记探针进行杂交。这种方法不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息。

9．荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依

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