内容发布更新时间 : 2024/5/1 23:13:00星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

培养基的配制和灭菌 细菌的纯种分离、培养 接种技术及菌落形态的观察

姓名：张世凡 学号：201330480123 课程名称：环境工程微生物实验

一、实验目的

1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。

2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。 3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。

4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。 5、学会几种接种技术。 6、平板菌落计数。 7、抗Cu菌的筛选。

8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。 9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。

二、实验原理

1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。 由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。

本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。

2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。接种时对接种针等采用灼烧灭菌。

3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。

4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。

5、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情况，初步辨别是何种类型的微生物。

三、实验器皿和材料

1、 样品：河塘底泥

2、 仪器、器皿：高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱、恒温培养箱、pH计、电子天平，酒精灯、移液枪（枪头）、药匙、滤纸、镊子、接种环、接种针、玻璃刮刀、玻璃棒、滴管、锥形瓶500ml*2、250ml*3、烧杯500ml、250ml、50ml各一个，试管15支，玻璃培养皿20套，塑料培养皿15套，10ml移液管一支，，量筒500ml，100ml各一个，玻璃珠若干。

3、 试剂或药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、蔗糖、NaCl、NaOH、NaNO3，MgSO4，

FeSO4，K2HPO4，KCl，KNO3，Cu2+母液（0.4ml/L）。

四、实验过程 （一）实验准备

1、洗涤

玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入干燥箱中烘干、备用。 2、包装

（1）移液枪和枪头的包装：移液管的吸端用细铁丝（或牙签）将少许棉花塞入构成1-1.5cm长的棉塞，起过滤作用（以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内）。棉塞要塞的松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内。然后将塞好棉花的移液管的尖端，放在4-5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30度夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下的纸折叠打结，待灭菌。

（2）培养皿的包装：培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸或报纸将10套培养皿（皿底朝里，皿盖朝外，5套、5套相对而放）包好。

（3）硅胶塞：硅胶塞四周应紧贴管壁和瓶壁，不能有折皱，以防空气微生物沿硅胶塞折侵入。硅胶塞的直径和长度视试管和锥形瓶的大小而定，一般约3∕5塞入管内。试管、锥形瓶塞好硅胶塞后，用牛皮纸包裹并用细绳或橡皮筋捆扎好，放在铜丝篓内待灭菌。 3.配制培养基、稀释水

1半固体培养基（200ml）：牛肉膏1g蛋白胨2gNaCl 1gH2O200ml至250ml烧杯中，调节pH至7.0-7.2；导入500ml三角瓶，再加入琼脂1g300ml至500ml烧杯中，调节pH至7.0-7.2；导入500ml三角瓶，再加入琼脂6g。 3选择培养基（200ml）：牛肉膏1g蛋白胨2g，NaCl 1g，H2O 200。

2固体培养基（300ml）：牛肉膏1.5g蛋白胨3g，NaCl 1.5g，H2O ml至250ml烧杯中，调节pH至7.0-7.2；导入250ml三角瓶，再加入琼脂4g。 4霉菌培养基：NaNO3 2g ，MgSO4 0.5g ，琼脂15-20g，K2HPO4 1g，FeSO4 0.01g，KCl 0.5g ，蔗糖 30 g，蒸馏水1000ml，pH自然条件，灭菌条件，0.072MPa(115℃，15-20min)【注：按比例配制200ml】

5放线菌培养基：可溶性淀粉2g,FeSO4 0.5g，KNO31g，琼脂20g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 0.5g，蒸馏水1000ml，pH7.0-7.2，灭菌条件0.103MPa(121℃，15-20min)【注：按比例配制200ml】

6稀释水的配制：用10ml移液管吸取9mlH2O至试管中(5支)塞棉塞包扎灭菌。