内容发布更新时间 : 2024/5/14 9:12:16星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

原核表达

1.SHMT1基因的登陆号是At4g37930，请你根据这个登陆号在基因库里查找该基因编码区的序列，设计添加酶切位点的特异引物，通过PCR扩增出来，再亚克隆到T载体中，然后用pET28a构建SHMT1基因的原核表达载体，表达SHMT1基因编码的重组蛋白，预测重组蛋白的分子量，并用亲和层析纯化重组蛋白，请用图解的方式写出你的实验方案。

酶切位点： BamHI (GGATTC)

XhoI(CTCGAG)

Sequence (5'->3')

Length

Tm GC%

50.00

Forward primerGGATTCCCAGAGATAGAGAGAGGTTTAGCG 24 59.78

Reverse primerCTCGAGACACTTGTGGGGTGAAACAG 20 58.24 50.00 （注: 如果PCR产物连接T载体再酶切，就没有必要加保护碱基；如果是PCR产物回收后直接酶切，还是加上保护碱基的好（因为保护碱基对内切酶切割DNA有很大影响） 保护碱基一般都加在5‘端，如果两端都加的话，将导致目的基因上引入若干个碱基序列，如果是基因表达实验的话，有可能导致下游基因移码突变。)

8. SHMT1基因PCR扩增和亚克隆到T载体（TA克隆）

9.载体转化到感受态细胞

10.阳性克隆检测

PCR检测;限制性酶切分析；菌液测序 11. pET28a构建SHMT1基因的原核表达载体

12. SHMT1在大肠杆菌中的表达与纯化

13.重组蛋白的分子量预测