内容发布更新时间 : 2024/12/28 19:03:11星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

TCA-丙酮蛋白浓缩

TCA protein precipitation protocol

Stock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA)

recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT.

Precipitation Protocol:

1. Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.

i.e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250μl TCA to 1.0ml sample. 2. Incubate 10 min at 4°C.

3. Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.

4. Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.

5. Wash pellet with 200μl cold acetone. 6. Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.

7. Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes. 8. Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.

9. For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for 10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.

TCA蛋白浓缩步骤：

储存液：100%（W/V）三氯乙酸（TCA）

配制：将500g TCA溶解到350ml dH2O中，室温储存。

浓缩步骤：

1. 加1倍体积的TCA储存液到4倍体积的蛋白样品中。如：在1.5ml的离心管中，1ml

样品中加入250ul的TCA。 2. 4度孵育10min。

3. 14 000rpm 离心5 min。 4. 弃上清

5. 加入200ul预冷的丙酮洗涤沉淀。 6. 14 000rpm 离心5 min。 7. 重复步骤4-6两次。

8. 95度5-10 min，晾干沉淀以彻底出去丙酮。

9. 加入2X或4X样品buffer，煮沸样品10 min，SDS-PAGE

改进版：

TCA蛋白浓缩步骤：

储存液：100%（W/V）三氯乙酸（TCA）

配制：将500g TCA溶解到350ml dH2O中，室温储存。

浓缩步骤：

10. TCA储存液加到样品蛋白中，终浓度为10%，TCA缓慢滴入蛋白样品中；蛋白样品不

易过多，2ml左右即可，使用10ml离心管。 11. 冰浴30-60min，时间久一点。 12. 14 000rpm 离心5 min。 13. 弃上清

14. 加入400ul预冷的丙酮洗涤沉淀，（丙酮事先放入-30℃冰箱内冷冻至少半个小时以上）。 15. 14 000rpm 离心5 min。 16. 重复步骤4-6两次。

17. 室温晾干沉淀，不易过干10-15min。

18. 加入水溶解，若有结块或不溶可用8M尿素溶解； 19. 区样品做跑胶样品处理，跑SDS胶。