内容发布更新时间 : 2024/12/27 10:56:44星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

AKTApurifier 层析系统操作入门

为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。 一 系统组件及系统功能介绍 1 系统组件 (1) 泵 Pump

系统泵：(system pump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。 (2) 阀 Valve

三通阀：(SV-903)两个。

分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2, B1/B2)切换。

七通阀：(INV-907)两个。

1. 上样阀(sample valve)，用于上样环切换 (load/inject) 和系统泵清洗时废液管 (waste) 切换；

2. 流向切换阀(flow direction valve)，用于层析柱流向切换 (downflow/upflow)。

八通阀：1. 出口阀(outlet valve)，选择收集出口。 (3) 收集器 Fraction

分段收集。 (4) 其它组件

梯度混合器(mixer)、柱前过滤器(on line filter)、紫外检测仪(UV-900) 、pH 电导仪 (pH/C-900 内含温度计)等。 2 系统功能

系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。 (1) 缓冲液pH及梯度配制

(a)梯度制备 (Gradient)

A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。 (b)自动缓冲液pH及梯度制备 (BufferPrep)

根据所用缓冲液配方，分别将A1、A2、B1、B2放入相应的溶液，由A泵及其三通阀调配缓冲pH，由B泵及其三通阀调配梯度。 (2) 上样

上样阀上样：将样品经进样阀 3 号口注入储存在样品环(Sample loop)内，再由阀门切换将样品带入层析柱；

系统泵上样：由三通阀选择进样管道，由系统泵将样品泵入层析柱。 (4) 收集

收集器收集：设置收集体积(Frac size)，可自动按条件收集。 出口阀收集：按需要选择不同出口管收集。 二 开机程序 1 开启电脑；

2 打开 AKTApurifier 电源；

3 启动 UNICORN 软件，输入用户名( User name) 和密码(Password)，默认用户(default) 密码为

default，待AKTA自检结束后，在system control窗口中显示系统准备就绪 （Instruments are ready) 。

三 UUNICORN 软件简介

Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下：

Main: 1. 系统关闭(Quit Program)和退出、登陆(Log on/off)；

2. 系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志等； 3. 文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等；

4. 方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。

Method Editor: 1.方法编辑；

2.缓冲液配方设置（如配方修改或新增配方等）

System Control: 1. 系统控制，可以手动控制(Manual)或运行方法(Run Method)；

2. 系统设置，包括Alarms/Special/Monitors/Curves；

3. 运行监测，有四个窗口：Run data/Curves/Flow scheme/Logbook。

Evaluation: 结果处理，如积分(intergrate)、移动(shift)、 计算

(Subtract/Add/Multiply/Divide )、 平滑(Smooth)、截取(Cut Curve)、绘制(Creat

Curve)、打印(Print)等

在每个窗口中均有专家建议(Adviser)和帮助信息(Help)。 四 系统控制 (System Contral) 1 手动操作 (Manual) 1.1 手动操作命令简介 (1) Pump 泵

Flow: 设定系统泵流速 Gradient: 梯度设定

BufferPrep_pH: 使用缓冲液配制功能时，设定pH值 SampleFlow: 设定样品泵流速 PumpWashpurfier: 系统泵清洗 (2) Flowpath 流路

PumpAInlet: A 泵入口三通阀切换 PumpBInlet: B 泵入口三通阀切换 InjectionValve: 上样阀切换

OutletValve: 收集出口阀切换 InjectionMark: 插入记号 (3) Alarm & Mon 报警、检测

WaveLength: 选择监测波长（1-3个） AutoZeroUV: 紫外吸收校零

AveragingTime: 计算紫外吸收平均值的间隔时间 SetCondScale 0%: 输入0%B时的电导 SetCondScale 100%: 输入100%B时的电导

Alarm: 设置压力、紫外、电导、pH等报警限

Watch: 监测参数设置，配合方法编辑中的watch功能 (4) Frac 收集：

Peak_Frac_Parameters: 计峰收集参数设定 FracCollect_900: 分布收集每管体积 Frac_Stop_900: 停止分别收集 FeedTube: 换管收集

Peak_Fraction: 计峰收集每管体积 Peak_FracStop: 停止计峰收集

OutletFraction: 出口阀每风分段收集每段体积等设置 ResetFracNumber: 将当前分布收集的管号计为第一管 (5) Others 其它

Block: 调用程序块（只在方法运行时可用）

Next_breakpoint: 跳到下一程序块（只在方法运行时可用） BufferPrepRecipe: 选择缓冲液配方 Set_Mark: 插入提示语

End_Timer: 设定结束运行时间

Record on/off: 手动运行时开始或结束数据记录 1.2 手动操作示例 (1) 梯度洗脱

设定流速、梯度、柱位、收集方法后即可运行。各命令无先后次序要求。 (2) 自动配制缓冲pH及梯度

必须最先设定缓冲液配方，然后设定其它参数如流速、pH、梯度等。 (3) 记录图谱

运行“Record on”命令，开始记录图谱，停止记录则运行“Record off”命令。 1.3 运行监测 （Monitoring a run)

在系统运行过程中，系统控制窗口同步显示系统检测的数据及各部件当前状态，共有四个窗口，显示不同内容，可同时打开：

Rundata: 运行参数 Curves: 数据曲线 Flow scheme: 系统流路图

Logbook: 运行记录

2 方法运行( Run Method)

启动方式

方法一：从主菜单(main)窗口方法(method)栏中，双击所选方法。

方法二：从系统(system control)窗口中，依次点击File、 Run，选择运行方法。 方法三：从系统(system control)窗口中，点击运行(Run)键，选择运行方法。 五 方法编辑

1 按照模板编辑新方法

(1) 点击方法编辑窗口中File>New,或点击工具栏中”New Method”按钮， 打开新方法编辑窗口； (2) 在“For system”栏中选择运行方法的系统， 选择“No Template”则可自行编辑方法；

(3) 在“Technique”栏中选择层析技术，可选内容有：

Anion Exchange: 阴离子交换 Cation Exchange: 阳离子交换 RPC: 反相层析 HIC: 疏水层析

Size Exclusion: 分子排阻（凝胶层析） Affinity: 亲和层析 Any: 通用模板

(4) 在“Template”栏中选择模板类别，以离子交换及凝胶过滤为例，有如下选择

IEX Templates（离子交换模板）:

CIP （在位清洗）

Manual Injection FP BufferPrep Manual Injection FP Segmented Manual Injection V BufferPrep Manual Injection V Segmented GF Templates （凝胶过滤模板）:

Manual Injection FP Isocratic Manual Injection V Isocratic 模板解释：

Manual Injection: 样品由手工（用注射器等）储存在样品环中，再由进样阀将样品注入层析柱

F: 用收集器（Fraction-900）分布收集 P: 使用计峰收集(Peak Fraction)功能 V: 用出口阀(Outlet Valve)分段收集 BufferPrep: 使用自动缓冲液配置

Segmented: 不用自动缓冲液配置，可使用梯度 Isocratic: 单一流动相

(5) 在“For column”栏中，选择所用层析柱型号，若在列单中没有，则选择“Any” (6) 点击“OK”键

(7) 若各参数符合要求，则选择“File>Save”，即可完成新方法编辑。 2 方法编辑

若按模板编辑的方法不能满足要求，或对已使用过的方法进行调整，可在“Method Edit”窗口中对方法进行编辑。编辑可分两类：1 运行参数编辑；2 程序编辑。 (1) 运行参数编辑 （Run setup）

在菜单中选择“View>Run setup”，则进入运行参数编辑窗口，各编辑窗口的内容为：

Variables: 控制程序可变参数编辑 Scouting: 筛选条件设定

Question: 开始运行的提问内容设定 Notes: 输入实验记录或提示 Gradient: 显示梯度曲线

BufferPrep: 开启或关闭自动缓冲液配置功能及选择缓冲液配方 Column: 显示层析柱参数 Reference Curves: 输入对照曲线