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本科学生实验报告

学号： 124120463 姓 名：

学院： 生命科学学院 专业、班级： 12级生物技术班 实验课程名称： 酶工程实验一 教 师： 吴倩

云南师范大学教务处编印

实验一 淀粉酶产生菌的分离及酶活性测定

一、目的要求

1、掌握从土壤中分离酶产生菌的方法，学会应用微生物生态知识分离产酶微生物。

2、掌握淀粉酶活性测定的原理，学会淀粉酶活性的测定方法。

二、基本原理

（一）淀粉酶产生菌的分离 1.菌种的采集

①要获得产生某种酶的菌种，可从富含该酶作用底物的场所去采集。

②胞外酶的稳定性和最适反应条件通常和菌的最适生长条件一致，因此要筛选具有某一特性的酶时，只要到相应的环境中采样即可。 2.富集培养

①原理：采集到的样品中如果所需的菌很少，需要先经过富集培养，使所需的菌大量繁殖，而不需要的菌则不生长或少生长，以利于筛选。 ②富集的方法：控制培养的温度、pH和营养成分等。 3.菌种的分离

①淀粉与碘液反应会形成蓝色化合物。

②淀粉酶能使淀粉分解为葡萄糖，而葡萄糖与碘反应不会形成蓝色化合物，结果可使淀粉酶产生菌周围形成透明圈，从而筛选出淀粉酶产生菌。

（二）淀粉酶产生菌的发酵及葡萄糖标准曲线绘制

1.原理：根据淀粉酶水解淀粉生成还原性糖，还原糖与3，5 -二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm进行测定。

2.酶活定义：在一定pH5.5、 37℃条件下，每分钟内从底物溶液中分解释放

1μmol葡萄糖所需要的酶量为一个酶活单位U/g。

酶活计算公式：酶活（U/g）=A×5×K×N×1000/（T×W） A:样品的OD值(平均值) K:标准曲线的斜率

N:稀释倍数 5:0.2毫升反应液转换为1毫升体积 T:反应时间（min） 1000:转换因子1mmol=1000μmol W:葡萄糖的分子量（180.2g/mol）

3绘制标准曲线

①先配制一系列浓度不同的标准溶液，用选定的显色剂进行显色，在一定波长下分别测定它们的吸光度A。

②以A为横坐标，浓度c为纵坐标，则得到一条拟合度较好的直线，称为标准曲线。

③然后使用用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，便可从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量

三、器材