内容发布更新时间 : 2024/12/22 16:24:56星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

11、染色

切片放入苏木精中染色约10~30min。染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。 12、水洗

用自来水流水冲洗约15min。冲洗过程中使切片颜色发蓝（或放入碱性水中也可，但用促蓝剂对伊红可能拒染，如果时间来得及，应以流水冲洗使切片显示蓝色为宜），但要注意流水不能过大，以防切片脱落，并随时用显微镜检查见颜色变蓝为止。 13、分化

就是将细胞质着的色褪去，使细胞核着色更加鲜明，也称分色。将切片放入1%盐酸乙醇液（盐酸1份+70%乙醇100份）中褪色，见切片变红，颜色较浅即可，约数秒至数十秒钟。这一步骤是H.E.染色成败的关键，，如分化不当会导致染色不匀，或深或浅，得到的切片染色效果差。如果染色适中，可取消此步骤。 14、漂洗

切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。 15、脱水Ⅰ

切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3~5min。 16、复染

用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。 17、脱水Ⅱ

放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3~5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 18、透明

切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。二甲苯应尽量保持无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。 19、封藏：中性树胶封存

切片经染色、脱水、透明后，即可用封藏剂将其封藏起来，目的是永久保存切片，便于镜检。常用的封藏剂一类为干性封藏剂如中性树胶、加拿大树胶等，另一类为湿性封藏剂如甘油明胶等。如果切片是经二甲苯透明，则用树胶作为封藏剂，树胶可以用二甲苯稀释至合适的稠度。如果切片是直接从水中或水溶液中取出，则常用甘油明胶作为封藏剂，可用于短期保存标本。

封藏的方法：

封片前应根据材料的大小，选用不同规格的盖玻片。材料透明后，按照下列方法进行封藏。在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片的一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角，然后再缓慢地将盖玻片放下，这样就可以减少或避免产生气泡。如胶液不足，可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。如胶液过多，可在干燥以后用刀刮去，并用纱布蘸二甲苯拭去残留的树胶。

染色结果：细胞核被苏木素染成蓝色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 [实验报告]

1、简述石蜡切片的主要过程。 2、分析影响HE染色的主要因素。 石蜡切片法实例（二） ——番红-固绿对染法 一、目的要求

1、 熟悉植物石蜡切片的制作过程。

2、 掌握番红-固绿对染法的基本原理和具体方法。 二、实验原理

石蜡切片法也是在研究植物细胞的形态结构等方面常用的制片方法。它可以使植物材料切成薄的薄片，又可以切成连续薄片，切片经染色，观察效果甚好。番红-固绿对染法，为植物制片上最普遍的一种二重染色法，其染色程序简单并能清晰地显示出细胞的结构。番红为碱性染料，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性染料，能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色。 三、实验用品 （一） 器材

切片刀，切片机，温箱，温台，解剖刀，镊子，单面刀片，台木，毛笔，蜡铲，酒精灯，包埋纸盒，染色缸，玻片盘，温度计，脸盆。 （二）试剂 FAA固定液，1%番红，1%固绿，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，石蜡，郝普特氏明胶粘片剂，树胶。 试剂配法：

1、FAA固定液（福尔马林-醋酸-洒精混合液） 福尔马林 5 ml

50%或70%的洒 90 ml 冰醋酸 5 ml

此液适用于植物组织，此液中的酒精，有用50%的，也有用70%的，一般薄嫩的材料右用50%的，厚硬的材料用70%的，醋酸的用量也可根据材料情况作适当的改变，对一些大块而密实的组织可增加用量，同时减少福尔马林的用量。固定时间可因材料及醋酸含量的变化而异，一般为5~20h。固定的材料，一般无需用水洗，可直接从70%的酒精开始脱水。 1、 1%番红

番红1g溶于100ml水中。 2、 1%固绿

1g固绿溶于100ml95%酒精中。 3、 郝普特氏明胶粘片剂 明胶 1g

蒸馏水 100ml 石炭酸 2g 甘油 15ml

配制时先将明胶溶解于30℃的蒸馏水中（在水浴锅内进行），待溶解后再加石炭酸和甘油，搅拌均匀后，趁热过滤，贮存于玻璃瓶中。 （三）材料

大豆、小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆等。

三、实验程序 1、 取材

取已培养好的大豆、小麦、蚕豆根或茎、叶等用刀片将其尖端约1.2cm根尖切割下来，用刀片切割其成熟区部分成5mm长的小段（亦可切带侧根的部分），将切好的材料放入玻管中。

2、 固定

将FAA固定液倒入盛有材料的玻管中，固定时间为24h。 3、 冲洗

用70%酒精换洗3次，每次0.5-2h。 4、 脱水

80%、90%酒精各1-2h，纯酒精（中间换一次）1-2h。 5、 透明

等量纯酒精及二甲苯中1-2h，二甲苯（中间换一次）1-2h。 6、 透蜡 方法同前。 7、 包埋 方法同前。 8、 切片

根为横切面，其厚度为8~10um。 9、 贴片。 方法同前。

10、 番红-固绿对染法染色程序如下： （1）切片在二甲苯中脱蜡，约10min。 （2）等量纯酒精二甲苯5min。

（3）经纯酒精，95%、90%、80%、70%、505、305各级酒精各5min。 （4）蒸馏水2-5min。

（5）1%番红水溶液染色2h左右。 （6）用水洗去多余染液。

（7）50%、70%、80%、90%、95%各级酒精脱水10min。 （8）1%的固绿（用95%酒精配制）染色10-40s。 （9）95%酒精洗一下。 （10）纯酒精脱水5min。

（11）等量纯酒精二甲苯混合液中5min。 （12）二甲苯5min。 （13）中性树胶封藏。 注意：

（1）番红与固绿在酒精中很容易脱色，因此在酒精中脱水时，不能放置太久。

（2）用固绿对染之前应检查番红染色的是否合适，所染颜色应稍深一些，以防其在以后脱水步骤中仍会脱色，如果太浅，应退回重染。