内容发布更新时间 : 2025/4/1 7:17:15星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

实验五 大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识

大黄为寥科植物掌叶大黄（Rheum Palmatum L.），药用大黄（R. offIcinale Beill）和唐古特大黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf）的根及根茎。是泻下、健胃、清热、解毒的常用中药。

大黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以甙的形式存在，总含量为 2 ~5%，大黄中主要的羟基蒽醌类化合物有大黄酚(1)、大黄素(2)、大黄酸(3)、大黄素甲醚(4)、芦荟大黄素(5)及其甙类。

R1 R2大黄酚OHOOHH CH3OH CH3H COOHOCH3 CH3H CH2OH′大黄素大黄酸R1OR2大黄素甲醚芦荟大黄素

大黄酚（Chrysophanol）为金黄色片状结晶（乙醇或苯），mp.196-197 ℃，能升华，可溶于丙酮、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸钠和碳酸氢钠水溶液 。

大黄素（Emodin）为橙黄色针状结晶（乙醇或冰醋酸），mp.256—257℃，能升华，易溶于稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液，可溶于乙醇、丙酮，在乙醚、氯仿、苯、四氯化碳、二硫化碳等溶剂中溶解度较小，几乎不溶于水。

大黄酸（Rheine）为黄色针状结晶（升华法），mp.321－322℃，330℃分解，易溶于碱水液、吡啶，微溶于乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、苯、石油醚。几乎不溶于水。

大黄素甲醚（Physcion）砖红色针状结晶（苯），mp.203-207 ℃，能升华，溶解性质与大黄酚相似。

芦荟大黄素（Aioeemodin）为橙黄色针状结晶（甲苯），mp.223-224 ℃，能升华，可溶于乙醚、热乙醇、苯、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液 。

羟基蒽醌甙有大黄素甲醚葡萄糖甙，大黄素葡萄甙，大黄酸葡萄糖甙, 大黄酚葡萄糖甙，大黄素-1-O-B-D-葡萄糖甙，芦荟大黄素-ω-O-B-D-葡萄糖甙。

一、实验目的

1. 学会PH 梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。 2. 学会两相酸水解法的操作技术。 3. 学会柱色谱的操作技术。

4. 学会羟基蒽醌类成分的化学检识及薄层层析检识方法。

二、实验原理

本实验利用大黄中的羟基蒽醌经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于三氯甲烷而被提出；再利用各羟基蒽醌类化合物酸性不同，采用PH梯度萃取法结合柱色谱法分离而得到大黄素单体。

三、实验内容

（一）游离蒽醌的提取

取大黄粗粉 50g, 置于 500ml 的园底烧瓶中，加氯仿——20%硫酸（5：1）300ml ，水浴加热回流3～4小时，纱布过滤，放冷减压抽滤，得到氯仿液。 （二）PH梯度萃取法分离

1. 将上述氯仿液转移至 500ml 的分液漏斗中，加5%碳酸氢钠水溶液80ml（先用 pH 试纸测定其 pH 值）分三次萃取（注意萃取时放置分层的时间应稍长些，以免萃取效果不好），合并三次碳酸氢钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至 pH2～3（观察萃取，酸化时溶液的颜色变化），放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄酸，留作鉴定用。

2. 将上述经碳酸氢钠萃取过的氯仿液用 5% 碳酸钠水溶液100ml（先用 pH 试纸测定其 pH 值）分三次萃取，合并碳酸钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至 pH2～3，放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄素，留作分离用。

3. 将上述经碳酸钠萃取过的氯仿液用 5% 氢氧化钠水溶液100ml（先用 pH 试纸测定其 pH 值）分3次萃取， 合并氢氧化钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至 pH2～3， 放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄酚、芦荟大黄素和大黄素甲醚，留作鉴定用。 （三）柱色谱精制大黄素

1. 湿法装柱

取柱层析用硅胶10g ，加30ml (PE：EtOAc=7：3)混合溶剂搅拌均匀，装入合适的色谱柱中，并用相同的混合溶剂洗脱至液面不再发生变化

2. 湿法上样

将上述大黄素的粗品溶于少量(PE：EtOAc=7：3)混合溶剂中,用滴管滴于色谱柱的顶端。

3. 洗脱 4.TLC检识

将相同的流份合并,回收溶剂,即得纯品大黄素。 （四）检识

1. 碱液试验：取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各 5mg 置于小试管中，加 95% 乙醇1ml 溶解，再加 10% 氢氧化钠水溶液2~3滴，观察溶液颜色变化。凡具有邻、对位酚羟基的蒽醌类化合物应呈紫-蓝色，其它羟基蒽醌类化合物多为红色。

2. 醋酸镁试验：取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各 5mg 置于小试管中，加 95% 乙醇 1m1 溶解，再满加0.5% 醋酸镁乙醇液 2~3 滴，观察溶液颜色变化。凡具有α-羟基的蒽醌类化合物应呈橙红色，具有间位二羟基的蒽醌昆类化合物应呈橙-红色，具有对 位二羟基的蒽醌类化合物应呈紫-红紫色，具有邻位二羟基的蒽醌类化合物应呈蓝紫色。

3. 蒽醌类成分的薄层层检识

吸附剂：硅胶 CMC-Na 硬板，于 110 ℃烘半小时。 样 品：a. 自制大黄酸丙酮溶液 b. 大黄酸标准品丙酮溶液 c. 大黄素结晶丙酮溶液 d. 大黄素标准品丙酮溶液 e. 自制混合物丙酮溶液 展开剂：(PE：EtOAc=7：3)

显色剂：先在日光和紫外光灯（365nm）下检视, 为橙黄色荧光斑点，再置于氨气中熏后日光下检视，斑点变为红色。