内容发布更新时间 : 2024/10/2 3:15:21星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

开题报告

（一）研究问题

一 丹皮酚的含量测定条件优选 二 丹皮酚的提取条件优选 三 丹皮酚包合物的制备条件优选

四 丹皮酚、丹皮酚包合物及其衍生物在在体大鼠小肠的吸收情况比较

（二）研究思路

从中药丹皮酚中提取分离丹皮酚，以大鼠为研究对象，通过在体肠管回流操作，采用紫外-可见分光光度法，比较丹皮酚及其包合物在大鼠体内的药动学特点，研究其在大鼠体内的吸收、分布、代谢、排泄过程。

（三）研究手段

一 含量测定：采用高效液相法测定徐长卿中丹皮酚的含量，通过测定波长、流动相、色谱条件的选择，

比较结果，优选最佳测定条件。

二 提取条件：采用不同的提取溶剂、提取方法、提取时间，比较提取的丹皮酚含量，优选最佳提取条件。 三 丹皮酚包合物制备：采用正交设计实验研究丹皮酚-β-CD的制备工艺。选择处方中β-环糊精用量(A,g),

固-液比例(B, β-环糊精：丹皮酚乙醇液)和包封液乙醇的浓度(C,%)3项为考察因素,各取3个水平,进行L9(3)正交试验,并以丹皮酚的利用率和包封率作为考察指标来筛选最佳工艺条件。

四 在体大鼠小肠吸收：通过不同的除蛋白试剂、定量方法，优选出最佳测定方法，在此基础上通过计算

吸收速率常数、半衰期等比较丹皮酚、丹皮酚包合物及其衍生物的吸收情况。

（四）课题意义

丹皮酚作为具有多种药理活性的传统中药，近年来逐渐引起了医药界的重视，经研究证实其是一个药理活性广泛、高效、低毒的一种单体成分，具有明显的抗炎、抗变态反应和免疫调节等生物活性，是个有希望的抗炎免疫治疗剂。其抗炎特点有别于非多体抗炎药如阿司匹林、保泰松、消炎痛等药物，没有非甾体抗炎药所特有的胃肠副反应、肾脏损害、血液系统、中枢神经系统、皮肤和肝脏等处的副作用。又无镇痛依赖性和耐受性，毒副作用小，因此，Pae有可能替代将要监管的非甾体类抗炎药，成为临床多个科室的首选药物之一。其在心血管疾病和肿瘤疾病方面也显示出其良好的药理活性，具有良好的开发前景和临床应用价值。

本文研究丹皮酚及其包合物在大肠的吸收动力学特征, 为丹皮酚的药效学及临床科学的拟定处方、确定给药方式、给药剂量、给药间隔和疗程提供理论基础和实验依据，对临床合理用药具有指导意义;也为设计丹皮酚新型给药系统提供可靠的生物药剂学依据。

（五） 文献综述

丹皮酚(paeonol，简称Pae)，又称牡丹酚，主要是从萝摩科植物徐长卿Cynanchum paniculatum(Bunge)Kitagawa干燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.芍药P.lactiflora Pall.的根皮中提取分离出来的一种活性成分，是一种小分子的酚类化合物，呈白色针状结晶，其分子量为166.17，分子式为C9H10O3，化学名称为2-羟基-4-甲氧基-苯乙酮，味苦、辛，微溶于水，能随水蒸气挥发，溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、苯和二硫化碳。含有酚羟基，故具有一定的酸性。加入三氯化铁的乙醇溶液，可产生蓝紫色反应；滴加浓硝酸数滴，可产生棕黄色反应，后变鲜绿色；熔化的丹皮酚中加一小块金属钠，剧烈反应，产生无色气体；可使溴水、酸性KMnO4溶液褪色；加入苯肼或苯肼衍生物、羟胺等试剂，可生成结晶性的衍生物。具有解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗过敏、镇静、催眠、降压、止血等多种药理作用。目前市场上对丹皮酚的需求量较大，除用于医药制剂原料外，还广泛用作牙膏及护发、护肤、美容等日化产品的原材料，在医药、香料、化工领域应用广泛。

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一、 丹皮酚制备工艺

Pae作为一种单体成分，具有较为广泛的生物活性和药理作用，通过从天然产物中分离提取及人工合成的方法得到Pae，具有重要的现实意义。 1水蒸气蒸馏法

水蒸汽蒸馏法提取丹皮酚，操作简单、经济，又可用于工业生产。丹皮酚的提取工艺流程为:丹皮细粉→加蒸馏水→加氯化钠→浸润→水蒸汽蒸馏→冷藏蒸馏液(4℃，24 h)→过滤→在滤液中加入氯化钠→重蒸馏→冷藏重蒸馏液(4℃，24 h)→过滤→合并结晶物→干燥得丹皮酚。丹皮酚提取量/(g·kg)=丹皮酚重量/样品重量。卞凌以镏出液中丹皮酚含量为指标，采用正交设计将水蒸气蒸馏法工艺条件进行优化。发现徐长卿中丹皮酚水蒸气蒸馏法提取工艺的最佳技术条件为徐长卿饮片加15倍量水，加入药材量10%的氯化钠，浸泡8h。

2 超临界CO2流体萃取

由于丹皮酚水溶性差，在理论上可以用超临界CO2有选择性地从丹皮中提取丹皮酚而不会破坏丹皮酚的结构，不影响丹皮酚的质量，而且CO2易回收，操作成本较低，这是一种更优秀的丹皮酚提取工艺。压力

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是SFE-CO2法萃取过程最重要的参数之一。实验表明，丹皮酚收率随压力的升高而增加，但达到15MPa时收率几乎达最大值。此时如果继续增加压力，超临界CO2流体的介电常数就会增加，极性进一步增大，反而使得丹皮酚在超临界CO2流体中的溶解度开始降低，从而使丹皮酚的提取收率有所降低，因此萃取压力不宜超过20MPa.萃取温度对萃取物中丹皮酚收率有显著影响，这主要是由丹皮酚的性质决定的。丹皮酚熔点低(49.5-50.0℃)，易挥发，提取过程中温度越高、时间越长，丹皮酚的含量和收率就越低，因此选择一个合适的萃取温度对挥发性药材的超临界CO2萃取同样重要。本试验优选的萃取温度为55℃，比水蒸气蒸馏、乙醇提取法等的提取温度低了很多，可以有效避免有效物质的损失。 3 溶剂法

以无水乙醇为溶剂，40℃温度下回流提取，即可将丹皮酚提取出来。醇提法提取工艺简单，有效成分提取多，似应为牡丹皮提取的最佳方法，但问题在于醇提液的后处理困难，因丹皮酚熔点低、挥发性强，实际生产中难于仅除去乙醇而不损失较多的丹皮酚，且提取过程中受热温度越高、时间越长，丹皮酚的含量和收率就越低 康业斌等人通过高效液相色谱测定研究了不同溶剂提取丹皮酚的效果，通过正交试验设计研究了四氯化碳提取丹皮酚的最佳条件。结果表明，溶剂法提取丹皮中丹皮酚的理想溶剂为四氯化碳。以牡丹根皮为材料，以四氯化碳为溶剂，最佳工艺参数为料液比1∶25(w/v)、丹皮粒径0.90 mm、浸提时间6 h。按此最佳工艺参数，一次提取，丹皮酚提取量11.428 g/k g，占提取总量的89.857%；两次提取合计丹皮酚提取量12.30 g/kg，占提取总量的96.79%。该工艺操作简便，可直接用于丹皮酚含量的测定，与水蒸汽汽蒸馏法相比，缺点是不能直接获得丹皮酚晶体，需要进一步分离、纯化、结晶。 4 微波提取法

微波萃取是利用微波能强化萃取的一种很有潜力的新型萃取技术。微波具有很强的穿透作用，能够使成分从细胞中较快的溶出，使提取时间大为缩短。娄方明等人设计L9(34)正交实验，安排辐射温度、辐射时间、乙醇浓度、溶媒倍数4个因素考察，以HPLC法检测。结果丹皮酚的最佳提取工艺为提取温度70℃、提取时间4 min、乙醇浓度40%和料液比1:40。因此，微波辅助提取丹皮酚具有提取效率高、提取时间短、操作成本低的特点，是一种值得推广的提取方法。

小结：丹皮酚的提取方法很多，每种方法各有优缺点。因CO2是非极性物质，而酚苷类成分极性相对较大，CO2超临界流体萃取法提取的丹皮酚量少，但能萃取出大量脂溶性成分。有机溶剂浸出法提取的效率高，适用于具有高分离能力的色谱分析法，若配以超声处理，可大大缩短分析测定时间，但混入的杂质较多。从节约能源、简化操作程序等方面综合考虑，直接水蒸气蒸馏法是丹皮酚最佳的提取方法。

二、 含量测定方法

丹皮酚的含量是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的制剂六味地黄丸等质量控制的重要指标。可以衡量其相关制剂工艺的稳定性和原料药的质量优劣，从而保证制剂的质量，以达到临床用药安全、有效的目的。丹皮酚定量分析方法的研究已相当深入和广泛，每种方法各有其优点及适用范围，工作中可结合自己的实际情况参考选用。

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1高效液相色谱法

此法具有分离能力高、灵敏度高、应用广泛的特点，对分析测定中药及其制剂更具特色。李冰等人以水蒸气蒸馏法处理样品；选用C18色谱柱，流动相为甲醇－水(55∶45)，流速0．9 mL/min，检测波长274 nm，柱温35℃。结果进样量0．0221～2．2120μg与峰面积线性关系良好(r=0.9999)；回收率平均为98．15%，RSD=2．03%(n=5)。所用方法快速、简单、准确、重复性好，可定量分析茂丹皮中的丹皮酚。 2 薄层扫描法

薄层扫描法操作简便、省样、省时，不失为测定丹皮酚含量的较理想方法，尤其是在中药复方制剂中，此方法对丹皮酚的测定可较好地排除其他成分的干扰。白少岩等应用反射法锯齿扫描法测定牡丹皮中丹皮酚含量，以环己烷:氯仿:无水乙醇(7:3:1)为展开溶剂，将待测液在0.13 mm硅胶G板展开，波长:s=274 nm，R:365 nm；下进行扫描。各项实验结果均较为理想。 3 气相色谱法

此法样品用量少，分离能力高，灵敏度高，与其它方法(如薄层、紫外法等)相比具有更为简便、快速、准确及专属性强的优点，是分析成分复杂中药的有效手段。杨佃志等人以正十五烷为内标物，采用毛细管气相色谱法进行含量测定。结果:丹皮酚在62 64~208 80 g/m l范围内呈良好线性关系，其相关系数:r=0 9999。平均回收率为100 62%(n=5)，RSD为2 34%。 4 分光光度法

分光光度法按具体不同原理又可分为紫外分光光度法、双波长示差光谱法、一阶导数分光光度法、正交函数分光光度法等，应用各种分光光度法测定丹皮酚含量，其技术较为成熟。

紫外分光光度法在药物分析领域中应用十分广泛，在80年代末就用应用紫外-可见分光光度法测定中药徐长卿中丹皮酚含量的报导。张玲等人应用紫外分光光度法直接测定双丹口服液中丹皮酚含量，不同含量加样回收率分别为98.59%、99.12%、97.54%。方法简便、快速、准确度好，精密度高，可做该制剂的质控方法。不过应选择适宜的提取分离方法，避免了其他成分干扰。王剑波

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等人使用双波长示差光谱法

测定丹皮酚含量，用双波长差示光谱法消除干扰组分的影响来测定丹皮酚含量，方法快速简便，结果准确，但丹皮酚在碱性溶液中稳定性较差，应在加碱后30m in内完成测定，以免造成误差。 5 其他方法

除以上方法外，还有流动注射化学发光法、电化学方法溴量法、库仑滴定法等对丹皮酚含量进行测定，但这些方法已不多用。

小结：鉴于丹皮酚本身具有一定的挥发性，在中药材及其制剂中含量均不高，加之中药成分的复杂性，在条件许可的情况下，毛细管气相色谱法应是中药材及其制剂中丹皮酚首选的分离分析方法。

三、 体内情况

药动学的发展对指导新药设计、改进药物剂型、优化给药方案等提供了有力依据。随着中药临床疗效的肯定和药效学的发展，中药药动学研究也逐渐受到关注。丹皮酚药理活性广泛、高效、低毒，积极开展丹皮酚与其它中药分子的组方药理活性及其药代动力学等方面的研究，对阐明其有效的物质基础和作用机制，指导临床合理用药及评价药物安全性，促进新药开发， 创制分子中药、促进中药现代化具有重要意义。 1 大鼠

目前丹皮酚及其复方制剂，已在临床上广泛应用。因此，探明该药物在肠道各区段的吸收特征对于进一步设计丹皮酚新型的定时、定速、定位给药系统具有十分重要的意义。当给予大鼠丹皮酚及其包合物时，肠道各部位的吸收速率按空肠、回肠、十二指肠、结肠顺序下降，药物在肠道内的吸收呈现一级吸收动力学过程，其吸收机制为被动扩散。丹皮酚包合前后在大鼠小肠全肠段（结肠部位除外）都有良好吸收，吸收机制没有发生明显改变，因此，可以考虑将丹皮酚制成丹皮酚-β环糊精在制剂中使用，以提高丹皮酚的稳定性

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。横山俊夫

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等用C标记丹皮酚投与大鼠、追踪C的放射能，观察吸收到机体内的丹皮酚的归

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宿情况。血中浓度：口服（16.6mg/Kg）后20分钟，血药浓度达到最高峰，浓度达到最高峰，此后急速降低。代谢、排泄：尿、粪中的排泄率，在给药后24小时内分别为89%和5%。尿中代谢产物为2，4-二羟基苯乙酮（丹皮酚的甲氧基加水分解成羟基）、2，5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮（在丹皮酚的羟基对位引入一个羟基）、丹皮酚，它们分别占21.0%，67.6%，11.4%，大部分以引入羟基形式排泄。它们大部分又都与葡萄