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某医院检验科 β-地中海贫血基因检测标准操作规程 发布日期:// 版本/版次： A/0 修订日期 ： 修订次数: 0 文件编号： 页 数： 第 1 页 共 8 页 某医院检验科 作业指导书

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标题：β-地中海贫血基因检测标准操作规程

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某医院检验科 β-地中海贫血基因检测标准操作规程 发布日期:// 版本/版次： A/0 修订日期 ： 修订次数: 0 文件编号： 页 数： 第 2 页 共 8 页 β-地中海贫血基因检测标准操作规程

1

原理

采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术：。 2

器材

2.1 试剂

2.1.1 全血基因组提取试剂：深圳亚能全血DNA快速提取试剂盒（25人份/盒）。

组成 试剂盒Ⅰ 组分 裂红液 变性液B 洗涤液I 洗涤液II 变性液A 溶解液 保存条件 室温保存 说明 变性液B中含有固体成分，使用前应充分摇匀。 试剂盒Ⅱ 2～8℃保存 冷藏 有效期：1年。

2.1.2 亚能β-地中海贫血基因诊断试剂盒（25人份/盒）。

主要组成：

试剂盒Ⅰ

组成成分 PCR 反应液 膜条 POD母液

试剂盒Ⅱ

TMB 矿物油 30％ H2O2

数量 25管 25张 1管 1瓶 1管 1管

规格 23?L 75?L 10mL 1mL 75?L

储存条件：试剂盒Ⅰ保存在﹣18℃以下；试剂盒Ⅱ保存在2～8℃。 有效期：6个月。 2.1.3 自备试剂：

2.1.3.1 20×SSC（pH 7.0）

NaCl 175.3g

某医院检验科 β-地中海贫血基因检测标准操作规程 发布日期:// 版本/版次： A/0 修订日期 ： 修订次数: 0 文件编号： 页 数： 第 3 页 共 8 页 柠檬酸钠 88.2g

加蒸馏水 750mL溶解，用pH计调pH至7.0，最后定容至1000mL，并高压灭菌保存。

2.1.3.2 10% SDS（pH 7.0）

SDS 20g

加蒸馏水 180mL溶解，用pH计调pH至7.0，最后定容至200mL。

2.1.3.3 1M柠檬酸钠（pH 5.0）

柠檬酸钠 294g

加蒸馏水 700mL溶解，用浓HCl调pH至5.0，最后定容至1000mL。

2.1.3.4 A液（2×SSC，0.1%SDS， pH 7.4）

20×SSC 10% SDS

100mL 10mL

加蒸馏水定容至1000mL

2.1.3.5 B液（0.5×SSC，0.1%SDS， pH 7.4）

20×SSC 10% SDS

25mL 10mL

加蒸馏水定容至1000mL

2.1.3.6 C液（0.1M柠檬酸钠，pH 5.4）

1M柠檬酸钠 100mL 加蒸馏水定容至1000mL

2.1.3.7 显色液（新鲜配制使用，按顺序加入以下溶液）

C液 TMB

19 mL 1 mL

30% H2O2 2 μL