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生物化学实验报告

姓 名： 张子荣

学 号： 3150901080

专业年级： 2015级临床医学

组 别： 第五实验室

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称 实验日期 合作者 评分

肝糖元的提取，鉴定和定量检测

2016.12.29 张林燕

教师签名

实验地点 指导老师

第五实验室 何肖娟

批改日期

格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New

Roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出

现多行、多页空白现象。 一、实验目的

1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项， 掌握其操作方法。

3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。 4.熟练运用溶液混匀的各种方法。 5.正确掌握溶液转移的操作。 6.正确操作使用分光光度计。

二、实验原理

1.肝糖原的提取

糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。 2.糖原的鉴定

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。 CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2

2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O 2CuOH = H20 + Cu2O (红色) Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色) 3.肝糖原的定量

糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。

三、材料与方法：以流程图示意

仪器及试剂：

1.仪器：

（1）普通离心机，室温-100℃恒温水浴箱（x2），722型分光光度计，精度为 10mg级

电子天平

（2）剪刀、镊子、研钵