内容发布更新时间 : 2024/12/23 22:07:04星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
分离效果，色点边界清晰为好。 2．配置展开剂
正丁醇：水：乙酸=4∶5∶1（体积比）按他们用量比例，先将正丁醇与水在分液漏斗中一起振摇10～15分钟，然后加乙酸再振荡。静置分层，下层弃去，上层作为展开剂，将展开剂倒入层析缸内盖上盖，放置0.5小时，使缸内形成饱和蒸气。 3．显色剂
95份正丁醇及5份（体积比）2mol?L-1的CH3COOH混合作为溶剂，加入茚三酮配成0.1%的溶液。
4．取5×30cm的滤纸一张，在距离一端2cm处用铅笔轻划一直线，在直线上用铅笔轻轻地划4个“×”号，并注上号码1，2，3……，在各点上用毛细管（管口要齐）分别点上谷氨酸、丙氨酸和苯丙氨酸已知样，在第四点上，点上未知样，每加一点样品就用吹风机以温热的风吹干，每个样品点三次。
将层析液倒在一培养皿中（约1～1.5cm深），先将点好样的滤纸上端夹在支架上，下端放在皿的外边（不要与溶剂接触），盖上层析缸盖。10分钟后，滤纸吸附蒸汽达到平衡，用夹子将滤纸下端迅速放入皿中，溶液因毛细现象逐渐向上渗透扩散，当前沿距样15cm左右处停止展析，取出滤纸，用铅笔划出溶剂前沿线。晾干，喷上显色剂到刚好润湿滤纸，用吹风机吹干，并在85～90℃烘干，则显出紫红色斑点。
（1）计算已知样和未知样各点的Rf值。
（2）根据已知样和未知样各点的Rf值。做定性分析。
比移值（Rf）表示物质移动的相对距离。
Rf =
例如：Rf（化合物A）=
溶质移动的距离
溶液移动的距离3.0cm=0.25 12cm3.3薄层色谱（PPC）
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薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。记下原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）：
溶质移动的距离Rf=
溶液移动的距离
3.3.1实验装置
毛细管点样 色谱展开
以薄层色谱分离偶氮苯和邻-硝基苯胺为例 [操作步骤]
（1）配制CMC溶液：按照每克羧甲基纤维素钠（CMC）100mL蒸馏水的比例在圆底烧瓶中配料，加入几粒沸石，装上回流冷凝管，在石棉网上加热回流至完全溶解，用布氏漏斗抽滤。也可在配料后用力摇匀，放置数日后直接使用。 （2）调浆：称取适量的硅胶H于干净研钵中，按照每克硅胶H2.5～3mL溶剂的比例加入CMC溶液，立即研磨，在半分钟内研成均匀的糊状。
（3）制板：将已经洗净烘干的载破片水平放置在台面上，用干净牛角匙舀取糊状物倒在载玻片上，迅速摊布均匀。如不均匀，可轻敲载玻片侧沿使之流动均匀。一般不可再加入糊状物，否则会形成局部过厚。每块板1满匙，铺制6块板约需硅胶H3.5g，铺制过程应在3～5分钟内完成。
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（4）活化：待硅胶固化定型并晾干后，移入搪瓷盘内，放进烘箱烘焙。升温至110～120℃保持半小时，切断电源。待冷却至不烫手时取出使用。如不很快使用，应放进干燥器中备用，或装进塑料袋中扎紧袋口备用。
（5）点样：在距薄层板一端约1cm处用铅笔画一水平横线作为起始线。用平口毛细管在起始线上点样，每块板上点两个样点，样点直径应小于2mm，间距至少1cm。如果溶液太稀，样点模糊，可待溶剂挥发后在原处重复点样。可留下一块薄层板作机动，其余五块板每块上各先点一个混合样点，另一样点依次为：（a）混合样，（b）偶氮苯；（c）邻硝基苯胺；（d）色带Ⅰ；（e）色带Ⅱ。 （6）展开：在展开槽中加入适量展开剂，展开剂的深度在立式展开槽中约0.5cm，在卧式展开槽中约0.3cm。盖上盖子放置片刻。将点好样的薄层板放入，使点样一端向下，展开剂不得浸及样点。盖上盖子观察展开剂情况，当展开剂前沿爬升到距离薄板上端约1cm时取出，立即用铅笔标出前沿位置，依次展开其余各板。 （7）测量和计算：用直尺测量展开剂前沿及各样点中心到起始线的距离，计算各样点的Rf值。
（8）比较分析：将（a），（b），（c）三块板并排平放在一起，比较分析由混合样点所分得的样点中哪一个是偶氮苯，哪一个是邻-硝基苯胺，并从分子结构解释其Rf值的相对大小。（d），（e）两块板放在一起比较分析，指出哪一色带为偶氮苯，哪一色带是邻-硝基苯胺，各色带是否纯净，原来的柱层层析分析效果如何。
本实验约需3小时。 [注释]
1.薄层板的制备应注意两点：载玻片应干净且不被手污染及吸附剂在玻片上应均匀平整。
2.点样与展开应按要求进行：点样不能戳破薄层板面；展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
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