内容发布更新时间 : 2024/7/3 4:36:28星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

AKTA全自动层析仪（AKTA Purifier）操作规程

1. 开机

打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。 2. 准备流动相和样品

所有的工作溶液和样品必须经过0.45 um的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈，甲醇），需在使用前用低频超声唾弃10 min。 3. 清洗管道及装柱

3.1 首先将A1管道放入平衡液或banding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution

buffer中，再system control窗口点击manual → pump → pump wash basic，选中A1，B1管道为ON，点击execute。泵清洗程序会自动运行至结束。

3.2 选择manual → pump → flow rate，输入流速为1 mL/min，点击insert；选择manual →

alarm＆mon→ alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），点击insert，点击execute。将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头（用几滴管道中流出的液体润湿，防止空气进入），稍微拧紧后将柱子下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道（可用柱子中流出的液体润湿接头，防止空气进入）。

4. 手动运行

4.1 平衡

柱子平衡好了（观察电导COND及pH的数值曲线走稳了），此时将紫外调零：选择manual →alarm＆mon→autozero，点击execute，就准备上样了。 4.2 上样

4.2.1

用样品环上样：将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍），不要取下注射器，选择manual →flowpath→injectionValve→ inject，点击execute。

4.2.2

用样品泵上样（AKTA explorer系统）：将样品置于Sample Valve 1号位（可以选8个不同的位置），点击manual → pump → Direct Load_960输入进样流速和体积，点击execute。注意样品的管路要事先充满缓冲液。

4.2.3

用系统泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击continue；待样品上样完毕后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。

4.3 洗脱

用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。选择manual → pump → gradient，按照自己的条件选择target% B（如100%）和length（如20 min），点击execute。 4.4 收集

4.4.1

固定体积收集：选择manual →Frac→ fractionation_900，输入每管收集体积，点击execute。结束固定体积收集选择manual →Frac→fractionation_stop_900，点击execute。

4.4.2

峰收集：选择manual →Frac→Peak_FracParametersUV，输入峰收集参数，点击insert，点击Peak_fractionation_900，输入每管最大收集体积，点击insert，点击execute。结束峰收集，选择Peak_fracStop_900，点击execute。

5. 编程及自动运行

5.1 点击method editor窗口中工具栏上的method wizard快捷图标，打开对话框。 5.2 按照对话框的要求选择条件，编号后点击finish出现编程结果，在变量框中可以更

改变量。点击工具栏中的保存快捷图标，输入文件名，点击OK。

5.3 运行自动程序：在system control窗口中点击工具栏中的RUN打开编好的方法，点

击next直到start开始运行。

5.4 运行中，按下工具栏中的hold键表示保持目前的运行模块状态不进入到下一个命令

中。点击manual → other → next breakpoint表示进入到下一个模块指令。 5.5 运行结束后，结果自动保存。 6. 清洗系统及拆柱

将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路（约10-20 mL即可）。然后再将A1和B1入口放入20% 乙醇中，同样的操作将乙醇充满整个管路保存（约20 mL即可）。系统给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，拧上堵头，再拆柱子的上端，拧上堵头。 7. 关机

从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。