内容发布更新时间 : 2024/5/4 23:33:58星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

Stealth? RNAi or siRNA Transfection

以24孔板为例，其余规格的转染见表1 1 中板，细胞密度为30-50%适宜。

注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。 2 第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下： A 将20pmol siRNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。

B 将1ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C 将A B两管混合，放置20min。

3 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。

Plasmid DNA Transfection

DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3

转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。 1 中板。

贴壁细胞：0.5-2X105 cells/well，第二天待细胞密度达到90%以上时转染 悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。 2 转染。

A 将0.8ug DNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。

B 将2ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。 C 将A B两管混合，放置20min。

转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。

Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection

中板密度* Culture Surf. vessel Vol. of Vol. of dilution medium 2X25ul 0.2ug DNA Lipofectamine ?2000 0.5ul 5pmol RNA Lipofec tamine ?2000 0.25ul area per plating well medium 100ul 1000-10000 96-well 0.3cm2 cell/well 0.5-2X105 cell/well 1-3X105 cell/well 2-3X105 cell/well 8-10X105 cell/dish 2-3X106 cell/dish 10cm 60cm2 6-well (35mm) 60mm 20cm2 10cm2 12-well 4cm2 24-well 2cm2 500ul 2X50ul 0.8ug 2.0ul 20pmol 1.0ul 1ml 2X100ul 1.6ug 4.0ul 40pmol 2.0ul 2ml 2X250ul 4.0ug** 10ul 100pmol 5ul 4ml 2X0.5ml 8.0ug*** 20ul 200pmol 10ul 15ml 2X1.5ml 24ug 60ul 600pmol 30ul *：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考 **：6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。 ***：6cm dish细胞质粒转染量4-6ug足以。