内容发布更新时间 : 2024/11/20 14:21:52星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

微生物的实验室培养

1.培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。

2．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

3．实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外线或化学药剂进行消毒，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。

4．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板。 5．微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。 6．长期保存菌种可以采用甘油管藏法。

一、培养基

1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 2．种类：(按物理性质分)

3．营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

二、无菌技术

1．获取纯净培养物的方法

获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒和灭菌 (1)概念：[填表] 比较项目 消毒 灭菌 (2)常用方法：[连线]

理化因素的作用强度 较为温和 强烈 消灭微生物的数量 物体表面或内部的部分微生物 物体内外所有的微生物 芽孢和孢子能否被消灭 不能 能

三、大肠杆菌的纯化培养 1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)操作步骤：

计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 (2)倒平板的方法及注意事项：

①请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 ②甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 ③丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 2．纯化大肠杆菌

(1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

(2)接种方法：

①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

(3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中，培养12 h和24 h后，分别观察、记录。

四、菌种的保存[连线]

1．不同培养基的具体配方不同，但一般都含( ) A．碳源、磷酸盐和维生素

B．氮源和维生素

C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素

解析：选C 培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。

2．获得纯净培养物的关键是( )

A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 B．接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D．防止外来杂菌的入侵

解析：选D 获得纯净培养物的关键是防止外来微生物的污染。 3．下列关于消毒和灭菌方法的选择，对应错误的是( ) A．培养基——高压蒸汽灭菌 B．牛奶——煮沸消毒 C．接种环——灼烧灭菌 D．实验者双手——化学消毒

解析：选B 对牛奶应采用巴氏消毒法进行消毒。 4．下列叙述错误的是( )

A．右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近 B．倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行

C．打开培养皿的皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置

解析：选C C项应是用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全打开，以防杂菌污染。

5．下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是( ) A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释

B．然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C．在适宜条件下培养

D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落

解析：选D 稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。

核心要点一

1．培养基配制的原则

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