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实验报告

实验课程：动物肝脏中DNA的提取 学生姓名：15级学长 学号：560311xxxx 专业班级：食科xxx班

2017年 5 月 2 日

实验背景：

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。

真核生物基因组DNA广泛应用在动植物的遗传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等方面的研究中.无论是基因工程,还是蛋白质工程,核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要对象,所以DNA的分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技术.哺乳动物DNA的分离通常是在存在EDTA及SDS去污剂条件下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提蛋白质而实现的

一、 实验目的

学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。

二、 实验原理

核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离成DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

DNA遇二苯胺（沸水浴）会生成蓝色物质，因此可用二苯胺鉴定DNA。

三、 实验仪器和材料

1、实验仪器

①量筒②离心机③离心管④移液枪⑤恒温水浴锅⑥研钵⑦电子天平

2、实验试剂和材料

①新鲜猪肝 ②0.1mol/L NaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠溶液③95%乙醇④NaCl固体⑤5%SDS溶液⑥V(氯仿)：V（异戊醇）20：1的混合液

四、 实验步骤

1、称取2.2g质量的猪肝，加入2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液并用碾砵磨碎；将匀浆倒入两个10毫升离心管中，在4000r/min下离心10min ，沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min；弃上清，取沉淀。

2、向沉淀中加入檬酸钠缓冲液至10ml，摇匀后将溶液平均分装到2个10毫升离心管中。每个管分别加入2.5 ml 氯仿-异戊醇