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外翻肠囊法评价黄连—大黄药对不同提取工艺中生物碱的肠吸收特性

作者：陈凯 王月亮 陈彦 李慧 刘宇灵 王佳奇 张晓莉 刘文丛 来源：《中国中药杂志》2015年第24期

[摘要] 采用水煎和醇提2种工艺，通过大鼠肠外翻模型评价黄连-大黄配伍药对中生物碱的体外肠吸收特征。以小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱4种主要生物碱成分为代表，采用一测多评法对其进行定量分析，计算吸收速率常数，进而评价2种工艺中，4种生物碱成分在大鼠不同肠段的体外吸收特征。结果显示：2种不同工艺提取物中上述4种成分的高、中、低剂量在小肠段均为线性吸收，R2大于0.99，符合零级吸收速率，小肠部位的吸收速率常数（Ka）表现为水煎组>醇提组。

[关键词] 黄连；大黄；肠外翻；吸收速率常数（Ka）

[Abstract] The research aimed to evaluate the intestinal absorption of alkaloids extracted by decoction and alcohol extraction processes from Rhizoma Coptidis-Rheum rhabarum herbal pair via everted gut sacs. Berberine， palmatine， coptisine and epiberberine were the main alkaloids in this herbal pair and taken as the standard indexes in the quantitative analysis with multi-components by single marker （QAMS） method， in order to calculate absorption rate constant （Ka） and

evaluate intestinal absorption characteristics of these four alkaloids extracted by different extraction methods in different intestinal segments in rats. The results showed that the four alkaloids extracted by two different processes in high， medium and low doses had linear absorption properties in the small intestine segment， which conformed to zero-order absorption rate， intestinal segment than 0.99. The absorption rate constant（Ka） of decoction group was higher than that of alcohol extraction group.

[Key words] Coptidis Rhizoma； Rhei Radix et Rhizoma； everted gut scas； absorption rate constant

doi：10.4268/cjcmm20152423

口服是中药及其制剂最常见的临床给药途径之一，口服制剂欲发挥疗效，吸收是关键。很多正在研究与开发的药物在临床阶段被否决的最常见原因之一就是药代动力学性质不理想，尤其是口服后肠吸收差[1-2]。药物经口服给药，首先经小肠吸收入血，再向体内各个组织器官分布，在特定作用部位发挥药效，因此了解药物的肠道吸收机制和吸收部位，对于指导临床用药、新药筛选具有重要意义[3-5]。

小肠是口服制剂的主要吸收部位，药物肠吸收在某一程度上能反映药物口服后整体的吸收情况，科学地研究中药肠吸收动力学，可以了解肠内酶及其细胞的屏障作用对药物吸收的影

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响，获得药物在肠道的吸收动力学信息，为中药制剂设计提供生物学依据。目前药物肠吸收的研究方法被广泛采用的有3种，其中肠外翻模型具有操作简单、 囊内液体较少、药物累积速度较快、药物用量较少等特点，成为目前研究体外肠道吸收较常用的生物模型。

黄连-大黄为经典配伍药对，源于仲景方，《伤寒论》中的大黄黄连泻心汤、附子泻心汤和《金匮要略》中的三黄泻心汤等方中的大黄-黄连配伍比例为 2∶1。

现代临床应用显示，黄连中的主要活性成分为原小檗碱类生物碱[6]，大黄中含有较多的鞣质和蒽醌等有机酸类成分，大黄-黄连配伍具有化痰祛湿、降热镇痛、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经等功效[7]。本研究采用肠外翻生物模型，一测多评法测定2种不同工艺的黄连-大黄提取物（HD提取物）中的小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱的小肠道吸收量，以此评价4种成分的小肠段吸收基本特征。 1 材料 1.1 仪器

LC20AT型高效液相色谱仪（日本岛津），ALC-M型组织-器官水浴系统 （上海奥尔科特生物科技有限公司 ），MTN-2800W型氮吹仪（AUTO SCIENCE 公司），GTR16-2 型高速离心机（北京时代北利离心机有限公司），KH3200E 型超声波清洗器（昆山和创超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

黄连药材饮片（河北安国市昌达中药材饮片有限公司），大黄（河北安国市昌达中药材饮片有限公司），盐酸小檗碱对照品（110713-201206，中国食品药品检定研究院，纯度99.9%）。

乙腈（色谱纯，Fisher 公司），甲醇（色谱纯，Fisher公司），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。 1.3 动物

SD 大鼠，雄性，体重（200±20） g，动物合格证号 SCXK（京）2015-0008。 1.4 Tyrode 缓冲液配制

NaCl 8.0 g，KCl 0.28 g，NaHCO31.0 g，NaH2 PO40.05 g，MgCl2 0.1 g 溶于500 mL 蒸馏水中，密闭冷藏；CaCl2 0.2 g 溶于 500 mL 蒸馏水中密闭冷藏；临用前将二者均匀混合，加入葡萄糖1.0 g即得。

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2 方法 2.1 色谱条件

Welch C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（50∶50）（每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g，再以磷酸调节pH为4.0），流速1 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长为345 nm。 2.2 对照品溶液配制

精密称定盐酸小檗碱对照品4.500 mg至50 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，冷藏，备用。

2.3 HD提取物的制备

2.3.1 HD水提物的制备 将黄连-大黄2∶1，加8倍水共煎3次，每次1 h，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得HD水提物。

2.3.2 HD醇提物的制备 将黄连-大黄2∶1，加8倍60%乙醇回流3次，每次1 h，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得HD醇提物，4种生物碱含量见表1。 2.4 供试药液的配制

称取2种提取物各1.60 g，分别加入2 mL甲醇使其溶解，再用Tyrode 缓冲液定容至100 mL，得2种储备液，逐级稀释成质量浓度为2，4，8 g·L-1的供试液。 2.5 大鼠肠外翻实验

2.5.1 肠外翻模型的制备 SD大鼠，实验前禁食16 h，自由饮水。脱颈处死，打开腹腔，小心将大鼠肠管同肠系膜剥离，分别取十二指肠、空肠、回肠各10 cm，放入Tyrode液中冲洗，直到没有内容物流出，小心剥离肠段表面的肠系膜和脂肪。将肠管一端结扎于塑料套管，小心将肠管翻转，用 Tyrode液冲洗后将另一端结扎，使之形成囊状肠管。向肠囊内注入2 mL空白Tyrode液，将其放入已有Tyrode液的麦氏浴槽中，实验过程中保持 37 ℃ 恒温，并向浴槽中通入95% O2+5% CO2，平衡 5 min 后，将麦氏浴槽中的 Tyrode 液倒出，待用。

2.5.2 HD提取物吸收实验 提取工艺的高、中、低浓度HD提取物药液 20 mL，分别注入37 ℃麦氏浴槽中，分别于15，30，45，60，90，120 min 从肠囊内取样200 μL吸收液，同时补足相同体积的空白 Tyrode 液。

2.5.3 样品处理 取2.5.2项下肠吸收液 200 μL，氮气吹干，加入甲醇 200 μL，超声混匀，15 000 r·min-1离心2 次，每次15 min，取上清液进样分析。