内容发布更新时间 : 2024/9/19 18:47:23星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

分子生物学常用试剂配制与保存 一 . 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺(Spermidine :

溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。分装成小份贮存 于 -20℃。

1mol/L精胺(Spermine :

溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。分装成小份贮存于 -20℃ 。 10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:

将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤 膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白 (BSA :加 100mg 的牛血清蛋白 (组分 V 或分子 生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性,

须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直 至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ,然后 分装成小份贮存于 -20℃ 。

8mol/L乙酸钾(potassium acetate:

溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml 。 3mol/L乙酸钠(sodium acetate:

溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml 。

0.5mol/L EDTA:

配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶 于水中,定容至 1L 。

1mol/L HCl:

加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。 25mg/ml IPTG:

溶解 250mg 的 IPTG (异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 于 10ml 水中, 分成 小份贮存于 -20℃ 。

100mmol/L PMSF:

溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟 于足量的异丙醇中, 定容到 10ml 。 分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于 -20℃ 。

20mg/ml蛋白酶 K (proteinase K:

将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶 K 完 全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于 -20℃ 。 10mg/ml Rnase A(无 DNase :

溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸钠水溶液中 (pH 5.0 。 溶解后于水浴中煮沸 15min , 使 DNA 酶失活。 用 1mol/L的 Tris -HCl 调 pH 至 7.5,于 -20℃ 贮存。(配制过程中要戴手套

10N 氢氧化钠(NaOH :

溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中 (磁力搅拌器搅拌 , 氢 氧化钠完全溶解后用水定容至 1L 。

100%三氯乙酸(TCA :

在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水, 用磁力搅拌器搅拌直至完 全溶解。(稀释液应在临用前配制

2.5%X -gal (5-溴 -4-氯 -3-吲哚-β-半乳糖苷:

溶解 25mg 的 X -gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺 (DMF , 用铝箔包裹装液 管,贮存于 -20℃ 。

10%SDS (十二烷基硫酸钠:

称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅 拌直至完全溶解。用水定容至 1L 。

2mol/L山梨(糖醇(Sorbitol :

溶解 36.4g 山梨(糖醇于足量水中使终体积为 100ml 。 DEPC (焦碳酸二乙酯处理水:

加 100ul DEPC 于 100ml 水中, 使 DEPC 的体积分数为 0.1%。 在 37℃ 温浴至少 12h ,然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min ,以使残余的 DEPC 失活。 DEPC 会与胺起反应,不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。 甲酰胺(deionized formamide:

直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中, 用磁 力搅拌器轻轻搅拌 1h ,可去除甲酰胺中的离子。 经 Whatman 1号滤纸 过滤除去树脂后分成小份,充氮气于 -80℃ 贮存(防止氧化。