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小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞CTC检测的应用价值评估

作者：葛含天 王达飞

来源：《中外医疗》2017年第22期

[摘要] 目的 分析小细胞肺癌（SCLC）者循环肿瘤细胞（CTC）检测的应用价值情况。方法 便利选择2013年12月—2016年12月宝应县人民医院收治的288例SCLC者为研究对象，另取健康体检者70名，良性疾病组56例为对照者。使用免疫磁珠阴性富集和免疫荧光化学染色法，分析静脉血内CD45-/CTC/CK18+数量，随访104例化疗者，分析SCLC者CTC检测价值。结果 和良性疾病者（3.57%）以及对照组（5.71%）相比，SCLC组（64.58%）的CTC检查结果差异有统计学意义（P

[关键词] CTC；角蛋白18相关抗原；免疫磁珠

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）08（a）-0046-03 [Abstracts] Objective This paper tries to analyze the application value of circulating tumor cells（CTC） inspection on small cell lung cancer（SCLC）. Methods 288 cases of SCLC from December 2013 to December 2016 in Baoying People's hospital were selected， 70 cases of healthy physical examination， 56 cases of benign disease as the control group. the number of venous CD45-/CTC/CK18+， CTC detection value of SCLC among the follow-up of 104 cases of chemotherapy were analyzed through negative immune magnetic beads enrichment and immunofluorescence

chemical dyeing method. Results CTC test results of benign disease was 3.57% and that of the control group was 5.71%， SCLC group was 64.58%， and there were statistical differences（P [Key words] CTC； Keratin 18 related antigen； Immunemagnetic beads

现如今，我国的肺癌发生率已经跃居世界之首[1-2]。当癌细胞进入到血液循环之后，一般经过免疫系统以及血液流动学转移，极少数肿瘤细胞会随着血液的流动而形成转移病灶。循环肿瘤细胞（CTC）在机体内水平代表了癌细胞血性转移水平，CTC在检测SCLC疾病的在早期诊断，监控复发转移以及判断预后结果等方面，均具有一定临床意义。结合实际情况，该文便利选择2013年12月—2016年12月该院收治的288例SCLC者为研究对象，并设立对照组以及良性肺部疾病组，全面分析该疾病患者的CTC检测应用价值情况，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料

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该文便利选择该院收治的288例SCLC者为研究对象，另取健康体检者70名，良性疾病组56例为对照者。 1.2 方法

①样本收集：使用真空采血管，收集病患肘部正中静脉血。为避免静脉穿刺过程内发生上皮细胞污染，不收集前2 mL血。收集后7.5 mL血液，后分别放置在ACD抗凝管内。②磁珠富集：将收集好的血液在48 h内完成CD45磁珠富集环节。③细胞固定：将通过以上步骤取得的细胞沉淀物质，放在立离心管管底，加入剂量为40 μL的ASI液悬浮细胞沉淀，吹打沉淀。后将混合好的细胞液加入完成包被的Cytospin玻片中央加样区，在室温环境下静止1～2 h，等到玻片干燥之后，实施染色，并将其放置在-80℃环境下保存。④细胞的化学染色，固定和显色：在暗室内，于玻片中滴入CD45抗体以及抗CK8，CK19以及CK19抗体以及0.2%BSA荧光体，静置1.5 h，后分别对TBS以及20%的BSA清洗3次，完成后，于细胞区域内加入内含DAPI荧光计数液7 μL，加盖玻片固定封存。完成所有步骤以后，可以在4℃环境下存储或立即使用显微镜观察计数。⑤PanCK染色：完成固定封片后，加PanCK染色。 1.3 统计方法

该实验使用SPSS 21.0统计学软件分析数据，计数资料用[n（%）]表示，使用χ2计算，使用Spearman’s相关性并分析法，进行相关性分析，多变量分析使用Logistic回归分析，P 2 结果

2.1 受试者基线资料情况

该实验一共纳入SCLC者288例。经比较分析，和良性疾病者（3.57%）以及对照组（5.71%）相比，SCLC组（64.58%）的CTC检查结果差异有统计学意义（P 2.2 健康者以及良性病变者、SCLC者CTC检查结果情况

对照组中CTC阳性率为5.7%，2例CTC阳性者数值在2～2 631个，中位值11个，男性以及女性阳性率为65.2%以及64.3%。CTC未吸烟者占46.0%，吸烟史/正在吸烟者79.5%，组间数据差异有统计学意义（P 2.3 细胞富集染色情况

阴性富集肿瘤回收率为92.0%，阳性对照细胞株H460和A549经荧光抗体染色后，存在绿色和红色荧光分布，叠加后为同一细胞，证实上述2种细胞株中存在细胞角蛋白CK18以及CK19。肺癌者敏感性以及特异性为98.2%以及72.9%。 2.4 SCLC者治疗前后CTC分布情况

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该实验对104例患者完成随访，结果详见表2、及表3。 2.5 患者长期预后相关性情况

在288例SCLC者中，死亡40例。与采样时间点相隔时间为0.5～3.7个月，中位数为1.2个月。该部分患者中，CTC数量为2～4个，无显著上升，其临床特征为CTC阳性全身多发性转移，PS分数低，证实CTC不可视为SCLC的预后指标，应联合患者的其他临床特征展开检测。 3 讨论

3.1 SCLC者临床分级和CTC相关性分析

该实验指出，经单变量分析证实，肿瘤T和N分期与CTC阳性无相关性，远处转移与其结果呈正相关（P

3.2 检测方式尚具有提升空间

该文使用了CK蛋白对癌症者CTC进行标记，特异性为72.9%，CK18、CK19是上皮细胞高表达结构蛋白，其在SCLC者中表达量高。但这种测试方式阳性率较低。CK家族在标记脱落细胞能力弱。出现这种情况的原因可能和癌细胞逃逸过程中出现“白细胞化”存在相关性。由于癌细胞在脱落、转移以及定植过程中，会发生类似白细胞Rolling以及爬移形式，在此同时会伴随细胞骨架结构改变，引起CK水平降低[4-5]。 3.3 化疗与CTC之间的关联性

该次结果实验指出，患者CTC数量在化疗前后存在明显差异。虽说完成治疗后，部分患者依旧有少量的CTC，但与治疗前相比（P

当前，诸多学者对于CTC和预后相关性进行研究，认为在治疗前和治疗后初次复诊时CTC多少在和预后情况存在相关性[8]。该实验研究时间跨度短，病例数不多，因此关于SCLC者循环肿瘤细胞（CTC）检测的应用价值有待进一步商榷。 [参考文献]

[1] 安书芬，申艳方.循环肿瘤细胞的检测在肺癌临床应用中的研究进展[J].医学综述，2016，22（9）：1694-1696.

[2] 郭巧梅，乔理华，王琳，等.循环肿瘤细胞检测对非小细胞肺癌的诊断价值[J].中华检验医学杂志，2016，39（8）：589-594.