内容发布更新时间 : 2024/12/27 11:58:57星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

实验报告

专业： 姓名： 孙程珂 学号： 3150100531 课程名称：生物化学实验（甲） 指导老师：杨劲树 成绩： 日期： 同组学生姓名： 地点：

一、实验目的和要求 二、实验内容和原理 三、实验材料和主要仪器 四、实验方法和步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果和分析 七、实验讨论和心得

一、实验目的和要求

1. 掌握蔗糖酶的提取纯化的操作方法。 2. 熟悉有关生化技术的基本操作。

二、实验内容和原理

1、酵母细胞破碎

本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 2、蔗糖酶的初步分离纯化

本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯。由于酶蛋白在分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能收到较好地分离提纯效果。

装 订 三、实验材料和主要仪器

1、实验材料： 市售干酵母粉

2、实验试剂： ⑴ 石英砂

⑵ 95%乙醇(-20℃）

⑶ 20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液

3、实验仪器

（1）电子天平（称量样品） （2）研砵（每组一套）

（3）50ml高速离心管（4支/组、离心管架1个/组） （4）托盘天平（离心管平衡用） （5）高速冷冻离心机 （6）恒温水浴箱（50℃） （7）制冰机

（8）1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架 （9）－20℃冰箱

线

实验名称：_ __________________姓名： 学号：

P.2

四、实验方法和步骤

1、酵母细胞破碎

称取市售干酵母粉10g，约3g石英砂放入研钵中直接研磨至尽可能成细粉末状（约15分钟），量取总体积50ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加在研砵内研磨10分钟，使呈糊状液体；将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后，4℃、12000r/min离心15分钟，收集上清液并量出体积V1（样品I）,另留1ml上清液（样品I）放置－20℃冰箱保存，用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析。 2、热处理

将上一步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴中，保温30分钟，并用玻璃棒温和搅拌抽提液，保温后迅速用冰浴冷却5分钟，转移至两支50ml离心管中，平衡后， 4℃，15000r/min离心15分钟，收集上清液并量出上清液体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存，用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀：

上清液（样品Ⅱ）加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，至少放置30分钟，然后转移至两支50ml离心管中，两支离心管平衡后，4℃，12000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀放置－20℃冰箱保存，以备用于下周实验。

装 五、实验数据记录和处理

V1=35.0ml V2=30.0ml

订 六、实验结果和分析

V1=35.0ml V2=30.0ml

线 七、实验讨论和心得

酶作为一种蛋白质，在发挥其生物功能需要保持适当的高级结构。如果提取工作在温度较高的环境中进行，那么过高的温度有可能会不可逆的改变、破坏这种高级结构，导致酶失活；其次，蛋白质在高温下易于降解，保持冰浴能够最大限度的降低蛋白降解的速率。所以酶液的提取要在冰浴中进行。

另外，实验操作过程中应小心注意，切勿打翻样品液。因为这个实验是之后一系列实验的基础，所以，提取的蔗糖酶的质量决定着后面实验的质量。