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人教版高中生物总复习

知识点梳理

重点题型（常考知识点）巩固练习

高考总复习 微生物的培养、分离、计数专题

【考纲要求】

1．简述微生物的培养过程，并总结其中的重要注意事项 2．说明微生物培养基的特点及种类 3．概述微生物的分离方法

4. 概述微生物的计数方法及注意事项 【考点梳理】

考点一、微生物的培养条件

微生物是形态微小，结构简单，需借助显微镜才能观察到的一类生物，包括细菌和蓝藻等原核生物、酵母菌和霉菌等真菌、病毒等。本专题主要讲解关于“细菌”培养的内容。

1. 微生物培养所需要的营养物质（由培养基提供）

营养要素 注意： 区分微生物同化作用类型为自养或异养的标准是其是否可利用无机碳源，而非其是否可利用无机氮源 水 无机盐 生长因子 （特殊营养物质） 主要来源 CO2、NaHCO3等 （自养型微生物可利用， 异养型微生物不可利用） 糖类、脂肪酸，醇类等 （异养型微生物利用） N2（固氮微生物可利用）、 NH3、铵盐、硝酸盐 尿素、牛肉膏和蛋白胨 在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高，作用同细胞中的水 为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素 补充微生物生物必需的微量有机物 维生素、氨基酸、嘌呤碱和嘧啶碱等 ①是酶和核酸的组成成分 （如培养乳酸杆菌时需添加维生素） ②参与代谢过程中的酶促反应 作用 作为微生物 合成有机物的原料 构成细胞的物质和代谢产物 异养型生物的主要能源物质 碳源 无机碳源 有机碳源 无机氮源 有机氮源 氮源 合成微生物的蛋白质、核酸等 注意：培养微生物除需要营养物质外，还需满足微生物对pH及氧气等的要求，这些条件也由主要由培养基来提供，一般培养真菌需将培养基调至酸性，培养细菌需调至中性或微碱性，培养厌氧微生物则要提供无氧条件。

2. 培养基的种类 区分标准 培养基种类 特点 用途 注意：某种培养基可以既为选择培养基又为鉴别培养基用途 选择培养基 培养、分离出特定的微生物 培养基中加入了某种举例： 化学物质，以抑制不需①利用不含氮源的培养基分离培养固氮菌 要的微生物的生长，促②利用不含碳源或仅含无机碳源的培养基进所需微生物的生长 上分离自养型微生物 资料来源于网络 仅供免费交流使用

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③培养纤维素分解菌时利用以纤维素为唯一碳源的培养基 ④培养尿素分解菌时利用以尿素为唯一氮源的培养基 根据微生物的代谢特鉴定、分离不同种类微生物 点，在培养基中加入某（如可用伊红－美兰培养基鉴别大肠杆菌，种指示剂或化学药品，用含刚果红和纤维素的培养基鉴别并分离以鉴别该微生物 纤维素分解菌） 加入了琼脂等 凝固剂 不加凝固剂 （如以纤维素为唯一碳源且加入了刚果红的培养基）。 鉴别培养基 固体培养基 物理性质 半固体培养基 液体培养基 微生物的分离、鉴定、活菌计数、保存菌种 观察微生物的运动；进行微生物的分类、鉴定 扩大培养、工业生产 培养基成分明确 合成培养基 （用化学成分已知的化学物质配制而成） 化学成分 天然培养基 含化学成分不明确 的天然物质 微生物的分类、鉴定等 工业生产 3.无菌技术

（1）在微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，其主要技术是无菌操作。主要包括以下几方面：

①对实验操作的空间，操作者的手和衣着，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近或接种箱内进行。 ④应避免已经灭菌处理的材料用具与周围其他物品相接触。

⑤进行接种等操作时，培养皿盖不应全揭开。 （2）消毒和灭菌的比较 概念 方法 高压蒸汽灭菌法 干热灭菌法 指使用强烈的理化因素杀死物灭菌 体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子（可彻底消灭微生物） 灼烧灭菌法 紫外线灭菌 （甲醛等）熏蒸灭菌 应用范围 一般均可用此法，如培养基 耐高温的、需要保持干燥的物品，如培养皿、试管等 金属等可直接灼烧的物品，如接种环、玻璃刮刀等接种器具 接种室、超净工作台 接种室等 使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部一部分消毒 对人体有害的微生物，不包括芽孢和孢子（不能彻底消灭微生物） 煮沸消毒法 （在100℃的水中煮沸5 min～6 min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢） 巴氏消毒法 （70℃～75℃下煮30 min或80℃下煮15 min。可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏） 化学药剂消毒 实验材料（如外植体）、实验者双手、培养室等 资料来源于网络 仅供免费交流使用

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紫外线消毒 补充知识，了解即可 ： 室内消毒等 波长不同的紫外线对微生物的杀伤力不同，所以紫外线法分紫外线灭菌和紫外线消毒两种情况。 【微生物的培养、分离、计数专题 411406 微生物培养的基本程序】 考点二、微生物培养的基本流程

注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。 【微生物的培养、分离、计数专题 411406 分离微生物纯种的方法】 考点三、微生物的分离纯化

1.利用特殊的接种方法分离纯种：平板划线法、稀释涂布平板法 （1）平板划线法：

原理：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上进行连续划线，在划线的过程中，菌体数量逐渐减少，菌体间的距离增大，距离足够大时，经培养，在划线末端处便可观察到由一个菌体繁殖产生的单菌落，挑取单菌落后继续培养，得到的便是纯种。 具体操作：

①接种环灭菌：将接种环放在火焰上烧红 ②取菌种：

在酒精灯火焰旁冷却接种环，打开盛有菌液的试管的棉塞，将试管口通过火焰，将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液，将试管口通过火焰，并塞上棉塞。 ③进行划线操作：

左手将皿盖打开一条缝隙，右手将蘸有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3至5条平行线，盖上皿盖； 灼烧接种环，待其冷却后，从第1区域划线的末端开始往第2区域内划线，重复以上操作，在3、4…区域内划线。划线结果如下图：

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