内容发布更新时间 : 2024/10/12 0:32:46星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

模拟试卷一及参考答案

一、名词解释（20分）

1. 基因工程; 2.基因文库; 3. RT-PCR ; 4. 同裂酶; 5. gel retardation;

6. Oligonucleotide-directed mutagensis; 7. 反义RNA技术; 8. α-互补; 9. YAC（Yeast artificial chromosome）;10. 基因治疗 二、填空（20分）

1. _________ 、 _____________和逆转录酶的发现是基因工程诞生的三大技术支持。

2. 1977年第一次在E. coli中合成了第一个人类蛋白 。

3. 质粒是存在于细菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的 、 、环状的双链DNA分子。

4. DNA提取过程中，苯酚的作用是 。乙醇或异丙醇的作用是 。 5. 将噬菌体DNA转入细菌的方法主要有 、 两种。

6. M13载体最多只能插入3kb的片段，而pUC8与M13的杂交载体称为 ，如pEMBL8可以克隆10kb的片段。

7. 建立生物的基因文库需要的克隆数目，可以通过公式 进行计算。

8. Ti质粒分子太大，很难找到单一酶切位点，不适于直接作为载体使用，为此可以采用 、 两种策略。

9. E. coli中，基因表达的启动与终止依赖于基因周围的一组信号，其中最重要的三个信号是 、 、 。

10. 碱性磷酸酯酶可以去掉DNA分子5’端的 基团，防止载体自连，提高重组率。 11. 酵母中，主要有YEp、YIp、YRp三种类型的载体，其中 的转化频率最高，而 最稳定。

12. 受体细胞经过一些特殊方法的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许有外源DNA的载体分子进入的细胞，这种细胞称为 。

13. 限制性内切酶EcoR I，其中Eco表示_________________，R表示___________，I表示_________________。

14. PCR反应的每一次循环都包括 、 、 _____________三个步骤，这样通过25-30cycles，可以扩增大量的目的片段。

15. PCR反应中的一个引物序列为AGACTCAGAGAGAACCCTTT，其Tm值大约是 。 16. 当体系中存在酶量过大，甘油浓度过高等情况时，限制性内切酶酶切往往产生额外片段，这种现象称为 。

17. 研究发现， 的细菌质粒，可以重组整合到植物染色体中，受这一现象的启发产生了直接转移技术。

18. lacZ’基因插入失活鉴定需要在培养基中添加 、 两种物质，根据蓝白斑选择重组克隆。

19. RNase H可以降解RNA:DNA杂交分子中的 。

20. 有些质粒在宿主体内只能产生1至几个拷贝，属于严谨型，另一些质粒在宿主体内可产生10-200个拷贝，称之为 质粒。 三、选择题（10分）

1. 在植物遗传转化中，可以利用P1噬菌体，它含有 基因，可以识别靶序列并将其切割下来。因此，我们可以将kan抗性基因置于其靶序列中间，利用这一系统将kan抗性基因从转基因植株中剔除。

a. Cre b. NPT II c. tra d. Cos

2. 以下那种措施不能提高外源DNA与载体的重组率（ ） a. 载体除磷

b. 外源片段：载体=2:1~10:1, 增加碰撞机会，减少自身环化 c. 利用TdT在3’端增加人工粘性末端，防止载体自身环化 d. 只增加载体浓度

3. 为了提高质粒DNA的产量，在细菌培养过程中，可加入（ ）增加质粒的拷贝数。 a. 噬菌体 b. 氯霉素 c. Kan d. amp 4. 下列哪种方法不能用于重组噬菌体的选择（ ） a. 利用lacZ’基因、cI基因的插入失活鉴定。 b. 利用λ噬菌体对P2前噬菌体抑制的敏感性。 c. 根据噬菌斑的大小。 d. 根据λ基因组的大小。

5. 低等真核生物如酵母、丝状真菌等的染色体可以通过下列哪种电泳方法进行分离。( ) a. 琼脂糖凝胶 b. 聚丙烯酰胺凝胶 c. OFAGE d. 变性琼脂糖凝胶 6. Sanger-Coulson测序法需要单链的DNA，因此一般用 作为克隆载体。 a. M13 b. plasmid c. λ载体 d. YAC

7. PCR反应中，普通的Taq 酶可以在3’端增加一个( )，利用这一特点，可以使用特殊的载体将PCR片段克隆出来。

a. A b. G c. C d. T

8. 利用E. coli生产某些人类蛋白存在一些问题，其中大部分问题可以解决，但( )到目前为止仍无法解决。

a. 偏爱密码子 b. 重组蛋白易降解 c. 基因中含有内元 d. 糖基化 9. 根癌农杆菌上的Ti质粒可划分为四个区域，其中( )可识别植物创伤信号，启动基因转移。

a. Vir区; b. T-DNA区; c. Con区; d. Ori 10. 大肠杆菌质粒克隆基因片段的大小是下列哪种情况？（ ） a. <3kb; b. <8kb; c. 20kb d. 40kb

四、分析题（10分）

1. 在下列6种限制性酶图谱中，有一种排列方式与凝胶电泳的带型是一致的。3种酶分别

是：E-EcoRI、N-NcoI、A-AatII。

1） 根据电泳中DNA带型，选择正确的图谱。

2） 将这块凝胶转移后进行Southern杂交分析，带星号的是与pep基因杂交的信号带，说明

pep在图谱中的位置。

2. 下图是Sanger法测序的部分结果，图中A,T,G,C分别代表加入ddATP, ddTTP, ddGTP,

ddCTP的反应管的电泳结果，根据电泳图谱读出所测片段的DNA序列。 A T G C

迁 移方

向

五、简答题（25分）

1. 植物基因转移的方法有哪些？各自有哪些优缺点？ 2. 如何测定DNA的浓度和纯度？ 3. 怎样提高平头末端的连接效率? 4. 标记探针的方法有哪些？

5. 分子标记技术在植物育种中有哪些应用？ 6. 限制性内切酶的命名的基本原则是什么？ 六、论述题（15分）

1. 结合农作物的育种目标，谈谈基因工程在作物品种改良中有哪些应用？

参考答案

三、名词解释（20分）

2. 基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗

传物质DNA直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。

3. 基因文库：某种特定的生物所含有的能够包含所有基因的足够数目的克隆的集合。

4. RT-PCR：又称为反转录PCR，首先利用逆转录酶合成cDNA，然后添加引物和聚合酶

扩增目的基因或基因片段。

5. 同裂酶：识别位点相同，切割位点也相同，但来源不同的限制性内切酶。 6. gel retardation：DNA结合蛋白后，分子量将会增加，电泳时的迁移率降低。

7. Oligonucleotide-directed mutagensis：寡聚核苷酸介导的突变，以单链DNA为材料，通

过与目的片段互补但在特异位点碱基已经改变的寡聚核苷酸引物合成一条新链，并通过选择得到突变的分子。

8. 反义RNA技术：与天然mRNA反向互补的RNA分子，在基因工程中用来阻止内源

mRNA的表达，从而改变生物的性状。

9. α-互补：lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体可以与带有完整的近操纵基因区段

的β-半乳糖苷酶隐性突变体之间实现互补。 10. YAC（Yeast artificial chromosome）：酵母人工染色体。

11. 基因治疗：用正常基因取代病人细胞中的缺陷基因，以达到战胜分子病的目的。包括基

因诊断、基因分离、载体构建、基因转移等步骤。 四、填空（20分）

1. 限制性内切酶和连接酶的发现、载体的发现 2.生长激素抑制素 3. 共价、闭合 4. 抽提蛋白质、沉淀核酸 5. 转染、体外装配 6. 噬菌粒 7. N=ln(1-P)/ln(1-a/b) 8. 双元载体系统、共整合载体系统 9. 启动子、终止子、核糖体结合位点 10. 磷酸 11. YEp、Yip 12. 感受态细胞 13. 属名和种名、抗性质粒、第一种酶 14. 变性、退火、延伸 15. 58oC 16. 星号活力 17. 超螺旋结构 18. X-gal、IPTG 19. RNase 20. 松弛型 三、选择题（10分） 1. a 2. d 3. b 4. c 5. c 6. a

7.a

8. d

9. a

10. b

四、分析题（10分） 1. 1）第5种

2) NcoI和AatII之间

2. 凝胶序列：5’ ATTGCCGTCACGATTACGGTAAC 3’ 所测片段序列：5’ GTTACCGTAATCGTCGGCAAT 3’ 五、简答题（25分）

7. 植物基因转移的方法有哪些？各自有哪些优缺点？ 直接基因转移技术：基因枪法，适于单子叶植物 原生质体法 PEG介导的方法

生物为媒介的方法：农杆菌介导转化法 病毒为媒介的转化 8. 如何测定DNA的浓度和纯度？

浓度：1）测定260nm的吸光值，1OD相当于50ug双链DNA/ml。 2）电泳检测

纯度：A260/A280=1.8，<1.8 表示含有酚或蛋白质；>2.0说明含有RNA。 9. 怎样提高平头末端的连接效率?

加大酶用量（10倍） 加大平头末端底物的浓度 加入10%PEG（8000），促进分子间的有效作用 加入单价阳离子， 150-200mM NaCl 提高反应温度

10. 标记探针的方法有哪些？

End filling

Nick translation 随机引物法

11. 分子标记技术在植物育种中有哪些应用？ 分子图谱的构建

品种、品系鉴定和杂交种纯度分析 亲缘关系分析

基因标记及标记辅助育种（Marker-assisted Selection，MAS） 数量性状因位点（QTL）的分子标记辅助选择 12. 限制性内切酶的命名的基本原则是什么？

取属名的第一个字母大写，取种名的前两个字母小写，构成基本名称。该种中发现的不同的酶按照顺序编号I, II, III等。如存在变种和品系，取变种或品系的一个字母。若酶存在于质粒上，则需大写字母表示非染色体遗传因子。 六、论述题（15分）

1. 结合农作物的育种目标，谈谈基因工程在作物品种改良中有哪些应用？

作物育种目标包括：高产、抗病、抗逆、品质等方面，目前，基因工程在作物品种改良中发挥了重要作用，并且在以下方面取得了重要进展。

延迟果实成熟 抗虫 抗病 耐除草剂

改变花型及花色 抗非生物胁迫 提高品质