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生物化学实验报告

姓 名： 范嘉俊

学 号： 3140070081

专业年级： 2014级中西医临床五年制

组 别： 第四实验室

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称 (Title of Experimetn) 肝糖原的提取、鉴定与定量 2016-01-07 刘海 实验地点(Lab No.) 指导老师(Instructor) 教师签名(Signature) 实验日期 (Date of Experiment) 第四实验室 殷志新 批改日期 (Date) 合作者(Partner) 总分 (Total Score) 1.实验原理

（1）肝糖原提取与鉴定 ①提取：

1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。

2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。 3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。 ②鉴定：

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。糖原还可被酸水解为葡萄糖。利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 （2）肝糖原定量测定

糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。

2.实验材料

（1）实验样品：鸡肝。 （2）主要试剂：

肝糖原的提取与鉴定： 95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，

0.15mol/LNaCl溶液， 浓盐酸，NaOH溶液， 碘试剂。

肝糖原定量测定： 30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，

蒸馏水，蒽酮显色剂。

（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，

恒温水浴箱，

试管架，三支支试管， 加样枪，加样枪架， 普通离心机， 研钵， 刻度吸量管， 白瓷反应器， 100ml容量瓶。

3.实验步骤 （1）实验流程 ①肝糖原的提取与鉴定