内容发布更新时间 : 2024/12/23 9:50:25星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
c. PH9.6肉汤实验:变浑浊为能在碱性环境中生长(阳性)。
d. 6.5%NaCl心浸液肉汤:由紫变黄为能在高盐环境中生长(阳性)。 e. 精氨酸双水解酶实验:变红色(对照不变色,仍为黄色)为阳
性。
五.奈瑟氏菌属和布兰汉菌属
奈瑟氏菌属主要有脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌;布兰汉氏菌属只有卡
他布兰汉氏菌。两者系需氧革兰阴性球菌。
⑴ 奈瑟氏菌的生物学特性:革兰阴性球菌,需氧,卵圆形或肾形,无动
力,氧化酶及触酶均阳性。培养时对营养要求高,能在巧克力平板或
有丰富营养的血平板上,在5~10%CO2环境中生长。
⑵.鉴定过程:
a. DNA酶实验阳性为布兰汉氏菌,阴性则为奈瑟氏菌。 b. 能在普通血平板上生长的为其他奈瑟氏菌,在巧克力平板上生长
的主要为脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。
c. 能使麦芽糖氧化分解产酸的是脑膜炎奈瑟氏菌,不利用麦芽糖的
是淋病奈瑟氏菌。
⑶.几种主要细菌对葡萄糖﹑麦芽糖﹑蔗糖的氧化分解产酸结果如下:
氧化分解产酸
菌种 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 淋病奈瑟氏菌 + - - 脑膜炎奈瑟氏菌 + + - 粘液奈瑟氏菌 + + + 卡他布兰汉菌 - - -
⑷ DNA酶实验:
a. 方法:将待鉴定细菌点种于含0.2%DNA的DNA琼脂平板上,培
养后用1mmol/LHCl覆盖平板,菌落周围出现透明环者为阳性。 b. 原理:某些细菌能产生DNA酶,可使DNA长链水解成由几个单
核苷酸组成的寡核苷酸链;长链DNA可被酸沉淀,而水解后形成后的寡核苷酸链则可溶于酸,故在DNA琼脂平板加盐酸,可在菌
落周围形成透明的溶血环。(肠杆菌科中只有沙雷氏菌和变形杆菌可产生DNA酶,阳性球菌中只有金葡菌能产生DNA酶。)
六.肠杆菌科
肠杆菌科是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌,其中对人致病性较强的鼠疫耶尔森菌(现已基本没有流行)和伤寒沙门菌;4类常引起腹泻和肠道感染的细菌(埃希氏菌﹑志贺氏菌﹑沙门氏菌﹑耶尔森氏菌)和8种常导致院内感染的细菌(枸橼酸杆菌属﹑克雷伯菌属﹑肠杆菌属﹑多源菌属﹑沙雷菌属﹑变形
杆菌属﹑普罗威登菌属和摩根菌属)。另外还有很多细菌是肠道的正常菌群,但在一定条件下也可致病(条件致病菌)。
实验过程中对于革兰阴性杆菌首先要做氧化酶实验,阴性为肠杆菌科细菌;阳性的为非发酵菌(我们实验室还没有简单的系统鉴定方法,一般要仪器上卡检
测)或弧菌科细菌。
1. 肠杆菌科的系统生化 ⑴.KIA试验(克氏双糖铁)
组成:乳糖/葡萄糖=10/1(斜面/高层,其长度最好是都是2C
M)
结果判断:斜面或高层变黄色:阳性;不变色(红色):阴性
高层中出现裂隙:产气阳性
高层中出现黑色(FeS):产H2S阳性
⑵.苯丙氨酸脱羧酶试验
细菌产生的苯丙氨酸脱羧酶使苯丙氨酸氧化脱羧后生成苯丙酮酸,再与10%的FeCl3试剂产成深绿色反应。(变形杆菌属﹑普罗威登
菌属和摩根菌属为阳性,其他为阴性) ⑶.枸橼酸盐试验(碳源利用实验)
在枸橼酸盐培养基中细菌能利用的碳源只有枸橼酸盐,分解后生成碳酸钠,使培养基变碱性,pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深兰色,即为枸橼酸盐试验阳性。(埃希氏菌属,志贺氏菌属,爱德华菌属为阴性,其他为阳性)
注意:接种时不能被糖,蛋白胨污染,要单独接种)
⑷.甲基红(MR)试验
细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等,使培养基的pH下降至4.5以下时,加入甲基红指
示剂由桔黄色变桔红色为弱阳性;变红色为阳性。
培养基成分:葡萄糖蛋白胨水
试剂:甲基红0.1g,酒精300ml,水200ml
主要用于大肠埃希菌(+)和产气肠杆菌(-)的鉴别;常与V-P实验联合使用,一般情况下两者结果正好相反,但也有例外如奇变两者同为阳性。
⑸.MIU(动力-靛基质-尿素)试验
①.动力:在半固体培养基中穿刺接种细菌培养后,若穿刺线周围
有细菌扩散生长,则为动力(+);清晰则为动力(-)。 ②.靛基质试验(吲哚试验):某些细菌有色氨酸酶,能分解培养
基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再与试剂对位二氨基苯甲醛作用
形成玫瑰吲哚而呈红色。
③.尿素试验:某些细菌能产生尿素酶,分解尿素产生大量的氨,使培养基变碱,再使培养基中的指示剂(0.4%酚红)变红色即
为阳性。
⑹.硝酸盐还原试验
NO3ˉ→→NO2ˉ(大肠)
NO3ˉ→→NH4+
NO3ˉ→→N2(沙雷氏菌属) 试剂甲:对氨基苯磺酸
试剂乙:α-萘胺
观察结果时甲液和乙液要等量加入,立即或10min内出现红色为阳性。若不变色,则要加入锌粉:①变红色,说明硝还试验为真阴性
②仍不变色,说明硝还试验真阳性,但原先还原产物不是NO2ˉ。 阴性结果出现时有三种可能:①细菌不能还原硝酸盐②亚硝酸盐继
续分解生成氨或氮③培养基不适合细菌生长 肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐。
⑺.氨基酸脱羧试验
细菌产生脱羧酶分解氨基酸使其脱羧生成胺和CO2,虽然各种细菌所产生的脱羧
酶不一定相同,但最后都能生成胺(赖氨酸→尸胺,鸟氨酸→腐胺,精氨酸→精胺)和CO2。然后胺能使培养基变碱性,通过指示剂(溴甲酚紫)由黄变紫即为阳性。对照管(无氨基酸)为黄色。 注意:①微量管接种好后要加石蜡,使培养基造成厌氧环境。(生成的胺更稳定,
还能诱导氨基酸脱羧酶的产生)
②对照管如果不显黄色,则结果不能判断。
应用:除伤寒沙门氏菌,鸡沙门氏菌外,其他沙门氏菌鸟AA,赖AA均为阳性;
除宋氏和鲍氏志贺菌外其他志贺菌也菌为阳性。
⑻.葡萄糖酸盐试验
微量管在培养18~24h后,加班氏试剂,水浴煮沸10min,由兰色变黄绿色到砖
红色即为阳性,不变为阴性。
1. 肠杆菌的鉴定流程
⑴.根据苯丙氨酸脱羧酶实验:
(+):变形杆菌属,普罗威登斯菌属,摩根氏菌属
(-):埃希氏菌属,志贺氏菌属,沙门氏菌属,枸橼酸杆菌属,爱德
华菌属;克雷伯菌属,肠杆菌属,沙雷氏菌属,哈夫尼亚菌
属。
⑵.苯丙氨酸脱羧酶实验阴性,加做葡萄糖酸盐实验
(+):克雷伯菌属,肠杆菌属,沙雷氏菌属,哈夫尼亚菌属
a. 动力(-):克雷伯菌属,属内种的鉴定主要根据吲哚试验(肺克吲哚实验阴性,三个亚种鉴别试验IMViC:肺炎--++,臭鼻-+-d,鼻硬结-+--) b. 动力(+),DNA酶(+):沙雷氏菌属 动力(+),DNA酶(-),枸橼酸盐(+):肠杆菌属(主要是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌,前者赖氨酸阴性,而后中为阳性) 动力(+),DNA酶(-),枸橼酸盐(-):哈夫尼亚菌属 (-):加做IMViC(靛基质-甲基红-VP-枸橼酸盐)试验 a. IMViC(++--):大肠埃希菌(H2S-)或爱德华菌属(H2S+)。 b. IMViC(-/++-+):枸橼酸杆菌属 ⑶.苯丙氨酸脱羧酶实验阳性,根据产H2S可分 (+):变形杆菌属 属内主要鉴定试验如下 普变 奇变 产粘变 潘尼氏 尿素酶 + + + + 鸟氨酸 - + - - 靛基质 + - - - 麦芽糖 - - + + 木 糖 + + - +
(-):普罗威登氏菌属,摩根氏菌属
普罗威登氏菌属:鸟氨酸:-;枸橼酸盐:+(属内鉴定尿素酶
及一些碳水化合物的产酸试验,如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑
海藻糖等)
摩根氏菌属:鸟氨酸:+;枸橼酸盐:-(只有一个种:摩氏摩
根氏菌)
⑷.志贺氏菌属和沙门氏菌属 这两种菌属在肠道选择性培养基(SS、麦康凯)形成不发酵乳糖的透明或半透明的无色菌落,但一些沙门氏能产H2S就会形成中心黑色的菌落,鉴定时在选择性培养基上挑选可疑菌落进行鉴定。
a.志贺氏菌属
主要系统生化:KIA:K/A(只有福氏6型能产气),H2S(-);
MIU:-+/--;
苯丙:-;枸橼酸盐:-。