内容发布更新时间 : 2024/5/11 12:52:48星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

水解蛋白粉检测方法

一、 实验仪器

1、 量筒10mL、100 mL、250 mL，各3个； 2、 具塞刻度比色管10 mL，40支； 3、 小烧杯50 mL，20个； 4、 移液管1 mL、5 mL，各10支； 5、 滤纸（定量或定性）?11cm，2盒； 6、 比色管架（3排孔，总30-36孔），2个； 7、 容量瓶（棕色）250 mL、100 mL，各4个； 8、 小牛角勺，若干个；

二、 实验试剂

1、X试剂 (AR) 2、K试剂 (AR) 三、 试剂配制

1、 3‰打底标样（简称“底标”）的配制

含3‰水解蛋白粉奶样配制方法，用精密天平（万分之一感量），用50mL洁净干燥小烧杯称取水解蛋白粉净重0.750g，然后用新鲜未掺假牛奶少量多次（每次30-40mL鲜奶）溶解，并无损转移至250mL容量瓶中，最后用同种鲜奶定容至250mL刻度，盖上瓶塞，反复颠倒振摇50次以上，以保证充分溶解并混匀。

2、 X试剂溶液（5%）的配制

用洁净小烧杯在天平上称取X（AR级）试剂12.5g，小心地用10mL量筒量取4mL浓硝酸倒入小烧杯中，进而加蒸馏水溶解，并

无损转移至250mL棕色容量瓶中（用少许纯水冲洗小烧杯3-4次均转移至容量瓶中），最后定容至250mL，摇匀待用。

3、 饱和K溶液的配制

用小牛角勺取K试剂两小勺，小心地置入100mL棕色容量瓶中，用洗瓶冲洗试剂至瓶下部，再加入蒸馏水至刻度，反复振摇50次，并放置过夜使之达到溶解平衡即为操作温度条件下的饱和溶液（注意观察容量瓶底部始终应有固体试剂残留才为饱和状态）。 四、 实验原理及相关说明

1、加入5%X试剂即可使乳中蛋白质变性凝聚，通过过滤操作即可除去，但水解蛋白实际为低聚肽类，X试剂与其不发生沉淀反应，通过该步骤即可实现乳中固有蛋白与人为加入的蛋白质成分分离。 2、因K试剂具有比X试剂更强的沉淀作用，其与低聚肽中的碱性基团（氨基）作用即可形成难溶的有机盐类沉淀，故使体系出现浑浊，当水解蛋白粉在奶样中含量高于1%时，此操作步骤则会较快出现浅黄色沉淀析出的现象

3、任何难溶物均具有与温度密切相关的溶度积常数，水解蛋白粉与K试剂的作用也不例外，操作中给待检样中加入“底标奶样”是为了提高检测方法的灵敏度，即通过该措施可以达到含量万分之五水解蛋白粉的奶样稳定检出阳性结果的目的。 五、 实验步骤

1、用1mL移液管吸取1.00mL“底标”奶液注入洁净的比色管，再用5mL移液管吸取待测奶样4.00mL注入加标比色管中，充分振

荡混匀样品。

2、移取5ml5%X试剂加入步骤1充分振荡混匀的样品，盖塞摇匀，等待5分钟后，将各比色管中奶样倒入滤纸中进行无漏斗过滤操作。

3、将上述滤液移取2.00mL注入另一洁净比色管中，加入2mL饱和K试剂溶液，盖塞摇匀。然后在白色或黑白相间或透明空间背景下观察混浊情况，若有淡黄色浑浊出现即为阳性。

4、操作时以未掺假鲜奶做对照，即在步骤1中移取未掺假鲜奶样5.00mL注入比色管中，以下操作同于样品检测。 六、 注意事项

1、K试剂有毒，易与多种金属作用生成更易爆炸且危险的盐，取用时不能使用金属药勺，需用塑料或小牛角勺取用。 2、对照样应在一定周期内更换。