内容发布更新时间 : 2024/5/20 1:35:58星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

【实验题目】

染色体标本制作与观察 【实验目的】

1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。 2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。

3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验材料与用品】

1. 器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、 小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等 2. 材料：小鼠

3. 试剂：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、 秋水仙素 【实验原理】

一、制作染色体标本的先决条件

? 细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使 细胞分裂（PHA） ? 设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素 二、染色体

染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。

染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。

染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析

描述染色体的四个参数：

① 相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以 用来表示每条染色体的长度。

② 臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。

③ 着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位

置 。

④ 染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。 三、操作原理

小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂，将其注入到小鼠腹腔中，可以阻止分裂细胞纺锤体的形成。

由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本次实验通过前处理、低渗、固定、制片染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

Giemsa染色法的染色结果：细胞核染成紫红色、细胞质和核仁染成蓝紫色 四、制作染色体标本的意义

了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图

染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。 染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。 染色体组型图的应用

① 鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64 ② 遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等。因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。

染色体标本的制作

1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞

2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，大量细胞停止在分裂中期 3）低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间距拉大，易于分散开 4）空气干燥：使细胞和染色体展开

5）固定：用carnoy’s solution（甲醇：冰醋酸=3：1）作用使蛋白质变性，对于染色体内的组蛋白来讲，变性后硬度增加，保持了染色体的即时形态，对细胞膜蛋白来讲，变性使细胞膜硬度增强。形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。

6）视野中染色体可能是20或40条左右，因为细胞可能处于减数第一次分裂和减数第二期分 裂时期。 【实验步骤】

一、小白鼠染色体标本制作步骤