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高效液相色谱—串联质谱法测定饲料中恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星

作者：王洋 李媛媛 王寒冰 李滢倩 王潇 来源：《吉林蔬菜》2015年第02期

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摘 要：建立饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法。试样用磷酸盐缓冲溶液提取，经固相萃取小柱净化，氮气吹干后用溶解待测。采用LC-MS/MS测定，色谱柱为C8反相色谱柱，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，电喷雾正离子模式电离，多反应选择离子检测（MRM），外标法定量。结果表明方法可用于饲料中恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星的同时测定。。

关键词：饲料；液相色谱-串联质谱；恩诺沙星；环丙沙星；诺氟沙星；多反应监测 【中图分类号】TS214.2 【文献标识码】A

恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星属于喹诺酮类药物，由于其具有抗菌谱广、杀菌活性强、毒副作用小及敏感微生物的最小抑菌浓度低等优点，被广泛应用于各种动物感染性疾病的预防和治疗。但有一部分生产者将其应用到饲料产品中，起到抑菌杀菌的作用。如果动物食用这种饲料会造成一定的危害，产生耐药性或一些毒副作用。因此，建立快速准确地测定饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的方法，对于加强饲料产品监管具有重要意义。

本文建立的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）快速准确地测定饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的方法，可满足检测要求，为饲料产品监督检验提供技术依据。

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1 材料与方法 1.1 仪器与材料

Agilent 1200LC/-6410B MS液相色谱/串联四极杆质谱仪（安捷伦科技有限公司）；BS224S电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；HYQ-2110液体混匀器（苏州捷美电子有限公司）；KQ-250DE超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司）；Microfuge离心机（美国BECKMAN公司）。

恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星标准品，纯度>98%（美国SIGMA公司）；乙腈、甲酸为色谱纯（Burdick&Jackson公司）；无水乙醇（分析纯，天津市化学试剂有限公司）；样品购自本地超市。 1.2 实验方法 1.2.1 标准溶液的配制

分别精确称取恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星0.005g于50mL容量瓶中，然后用甲醇溶解并稀释至刻度，于冰箱4℃以下避光保存。用流动相液将恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星储备液液稀释成10μg/mL的工作液。 1.2.2 样品处理

称取试样0.5g（精确至0.1mg）于50mL具塞离心管中，准确加入6mL磷酸盐缓冲溶液，涡旋混匀，再加入10mL乙腈，于涡旋振荡器振荡提取1min，5000r/min离心5min，上清液过滤到鸡心瓶中，在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液，10mL乙腈，重复以上步骤，合并上清液，于50℃旋转蒸发，至乙腈全部蒸出。加入5mL磷酸盐缓冲溶液，混匀。

固相萃取小柱先用5mL甲醇、5mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液活化，保持柱体湿润。将样液以1mL/min的流速全部过HLB固相萃取小柱，待液体完全流出后，先后以4mL水，4mL甲醇水溶液淋洗，抽干，用4mL氨水甲醇溶液洗脱于10mL具刻度离心管中，洗脱液于50℃，氮吹至约0.2mL时停止浓缩，用甲醇-甲酸溶液定容至1mL，5000r/min离心5min，过0.2μm滤膜，供液相色谱串联质谱分析。 1.2.4 仪器参数和测定条件

液相色谱条件：C8反相色谱柱（C82.1mm×50mm id，5μm）；柱温：30℃；流速：0.5mL/min；进样量：5μL；流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（15+85）。

质谱条件：电喷雾离子源（ESI）；正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；喷雾压力：35psi；干燥气流速：8mL/min；离子化温度：340℃。