内容发布更新时间 : 2024/5/4 0:29:20星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

考点1 基因工程

1．基因工程的3种基本工具

(1)限制性核酸内切酶：识别特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。

(2)DNA连接酶：①E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端；②T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。

(3)载体：①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；②有一个至多个限制酶切割位点；③具有特殊的标记基因，以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。

提醒 (1)限制酶≠DNA酶≠解旋酶

限制酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开；DNA酶是将DNA水解为基本组成单位；解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。

(2)使用限制酶的注意点：a.一般用同种限制酶切割载体和目的基因；b.不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。 (3)DNA连接酶≠DNA聚合酶

DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。 2．基因工程的操作流程

(1)目的基因的获取：①从基因文库中获取。②利用PCR技术扩增。③化学方法人工合成。 提醒 ①PCR技术扩增 a．原理：DNA双链复制。

b．条件：模板DNA、引物、游离的脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶。

? ↓

?复性：55～60 ℃，引物与单链DNA结合

c．过程? ↓

?延伸：70～75 ℃，在热稳定DNA聚合酶?Taq酶?? 作用下合成子链

不需要模板。

(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建 ①基因表达载体的组成

变性：90～95 ℃，DNA解链

②化学方法人工合成：已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，

②构建过程

提醒 ①基因工程中的载体与细胞膜上的载体不同。 ②启动子、终止子

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a．启动子(DNA片段)≠起始密码子(位于mRNA上)。 b．终止子(DNA片段)≠终止密码子(位于mRNA上)。 ③目的基因插入位置：启动子与终止子之间。 (3)将目的基因导入受体细胞

根据受体种类确定基因工程的受体细胞及导入方法。

①植物：植物体细胞或受精卵——导入方法常用农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法(本法针对单子叶植物)。

②动物：受精卵——导入方法为显微注射法。 ③微生物：细菌——导入方法为感受态法。 (4)目的基因的检测与鉴定的方法

①检测目的基因是否导入受体细胞：DNA分子杂交技术。 ②检测目的基因是否转录出mRNA：分子杂交技术。 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原—抗体杂交技术。 ④个体生物学水平鉴定：根据表达性状判断。 3．蛋白质工程

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