内容发布更新时间 : 2024/10/17 23:29:21星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

实验室常用溶液的配置

Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL

称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30℃冻存

X-gal：贮存浓度为20mg/mL

称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌

IPTG：贮存浓度为0.84mol/L

称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30℃保存

CaCl2：贮存浓度为1mol/L

称取1.11g CaCl （或者CaCl:2H2O 1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30℃保存

LB培养基：

胰蛋白胨（Tyrtone） 10g/L

酵母提取物（Yeast Extraction） 5g/L 氯化钠 10/L

根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出

无DNA酶的RNA酶：

将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris-Cl（PH7.5）、15mmol/L NaCl 中，配成10mg/mL 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃

Bradford 贮存液 95%乙醇 100mL 88%磷酸 200mL G 250 0.35g

室温下可储存，一般4℃

Bradford 工作液

Bradford贮存液 30mL 双蒸水 425mL 95%乙醇 15mL 88%磷酸 30mL 储存于4℃

超声破碎缓冲液

KCl 300 mM 22.37 g KH2PO4 50 mM 6.81 g

EDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g 定容至1 L，调pH至8.0

包涵体洗涤液

KCl 300 mM 22.37 g KH2PO4 50 mM 6.81 g

EDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g 尿素 2 M 120 g

Triton X-100 0.5% 5 ml 脱氧胆酸钠盐 0.1% 1 g 定容到1 L 调pH至8.0

匀浆缓冲液（pH=7.5） 成分：

20mM HEPES 0.002mol=0.476g 加入0.952g 1.5mM MgCl2 0.00015mol=0.0036g 加入0.0072g 0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 加入0.01168g 0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 加入1.16g

0.5mM 钒酸钠 0.00005mol=0.0092g 加入0.0184g 加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.5 0.2mM DTT 总体积500μL加入0.1μL 0.4mM PMSF 总体积500μL加入20μL 1%SDS 加入50μL 10% SDS

其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入 DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌 PMSF配成10mM母液，溶于异丙醇

10*PBS

NaCl 80.0669 g KCl 2.0129 g

Na2HPO4 14.1960 g KH2PO4 2.4496 g

水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4

Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10 mM PO43?, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KCl

If used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121°C, liquid cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should be

kept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.

转膜缓冲液（含有SDS） 1L剂量

甘氨酸 2.9g Tris 5.8g SDS 0.37g 甲醇 200mL 水 800mL 10×蛋白电泳缓冲液 1L剂量

Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g 甘氨酸(Mr 75.07) 188g SDS (Mr 288.38) 10 g 加水至1L

用时稀释10倍即可

30％丙稀酰胺 1L 剂量

丙烯酰胺 290g

N,N’-亚甲基双丙稀酰胺 10g

溶于600ml蒸馏水中，加热至37℃溶解，补足体积至1L，过滤，且pH不大于7.0

1 M Tris-Cl（pH6.8）

60.55 g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml

1.5 M Tris-Cl（pH8.8）

90.83g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。加约14.5ml浓盐酸，再调整到500ml体积

1M DTT

用20mL 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH=5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装

考马斯亮蓝R-250染液 在90mL甲醇：水（1:1）和10mL冰乙酸混合液中溶解0.25g考马斯亮蓝R-250，过滤后室温保存

蛋白酶K（20mg/mL）

灭菌的50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM乙酸钙溶解，配置成浓度为20 mg/mL的溶液，-20℃保存

流式缓冲液PBS+5% FBS+0.02% sodium azide