内容发布更新时间 : 2024/5/21 20:18:15星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

实验十一 秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定

秦皮为本樨科白蜡树属植物白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦沥白蜡树（F.rhynchophylla Hance）或小叶白蜡树（F.bungeana DC）的树皮,味苦，性微寒。具有清热、燥湿、收涩作用。主治温热痢疾、目赤肿瘤等症。

秦皮中含有多种内酯类成分及皂苷、鞣质等，其中主要有七叶苷、七叶内酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有退热作用，毒付作用小，几无苦味。适于小儿服用。

一．秦皮中主要成分的结构及性质 1．七叶苷（esculin），又叫马粟树皮苷：白色粉末状结晶，mp205～206℃。易溶于热水（1:15），可溶于乙醇（1:24），微溶于冷水（1:610），难溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。在稀酸中可水解。水溶液中有蓝色荧光。

HOHOOOHOOO gluO

七叶苷（esculin） 七叶内酯（esculetin）

2．七叶内酯（esculetin）：黄色针状结晶，mp276℃。易溶于沸乙醇及氢氧化钠溶液，可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，几不溶于乙醚、氯仿。

3．秦皮苷（fraxin）：mp205℃。

OHOCH3OgluOOOHHOOO CH3O

秦皮苷（fraxin） 秦皮素（fraxetin）

4．秦皮素（fraxetin）：mp227～228℃。 二．实验目的

1．掌握从秦皮中提取、分离七叶苷、七叶内酯的方法。 2．熟悉七叶苷、七叶内酯的性质及鉴定法。 三．实验原理

根据七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。

四．实验材料 材料

秦皮粗粉、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、无水硫酸钠、甲醇、1tCl3、浓氨水、甲苯、甲酸乙酯

仪器

索氏提取器、紫外灯、试管、梨形分液漏斗、布氏漏斗、精制棉、循环水泵、旋转蒸发器、电热套、水浴锅

五．实验内容

（一）提取：取秦皮粗粉150g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。

（二）分离：在上述浸膏中加40ml水加热溶之。移入分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲醇中，浓缩至适量，放置析晶，即有黄色针状结晶析出。滤出结晶。甲醇、水反复重结晶，即得七叶内酯。

将乙酸乙酯萃取过的水层浓缩至适量，放置析晶，即有微黄色晶体析出。滤出结晶。以甲醇，水反复重结晶，即得七叶苷。

（三）鉴定：

1．化学检识：取七叶苷、七叶内酯各少许分别置试管中，加乙醇1ml溶解。加1tCl3

溶液2—3滴，显暗绿色，再滴加浓氨水3滴，加水6ml，日光下观察显深红色。

2．薄层鉴定： 吸附剂：硅胶G

样品：七叶苷、七叶内酯标准品及自制七叶苷﹑七叶内酯的醇溶液。 展开剂：甲醇—甲酸乙酯—甲苯（1:4:5）

显色：1）UV254灯下观察，七叶苷为灰色荧光，七叶内酯为灰褐色。 2）以重氮化对硝基苯胺喷雾显色，七叶苷和七叶内酯均呈玛瑙色。 结果：七叶苷Rf=0. 04，七叶内酯Rf=0.28

实验六 从三棵针中提取、分离小檗碱与小檗胺

三棵针为小檗属(Berberis)植物，种类繁多，是黄连、黄柏的重要代用品。根中含多种生物碱，有季胺类生物碱，如小檗碱(Berberine)1.2—3％，根皮含3—5.5％，少量巴马亭(Palmatine)、药根碱(Jatrorrhigine)、非洲防己碱(Columbamine)、木兰花碱(Magnoflorine)，有叔胺碱，如小檗胺(Berbamine)0．45—3.84％，尖刺碱(Oxyacanthine)，异粉防己碱(1sotetrandrine)等。

小檗碱是一种常用的抗菌药，对菌痢、肠炎、上呼吸道感染等疾病有良好的疗效。小檗胺有升白、降压、利胆及镇咳等作用，对预防和治疗白细胞减少疗效较好。

一．三棵针中已知生物碱的结构和性质 1．小檗碱(Berberine)

一种异喹啉生物碱。分子式[C20H18NO4]。又称黄连素。存在于小檗科等4科10属的许多植物中。小檗碱从乙醚中可析出黄色针状晶体。熔点145℃。溶于水，难溶于苯、乙醚和氯仿。小檗碱为一种季铵生物碱，与氯仿、丙酮、苯均能形成加成物，从水或稀乙醇中析出的晶体带有5.5分子结晶水；若从氯仿、丙酮或苯中结晶，也带有相应的结晶溶剂分子。小檗碱用不同的碱处理，可得到季铵式、醛式和醇式等三种不同形式的小檗碱，其中以季铵式最稳定。小檗碱盐酸盐（Berberine Chloride）C20H16O4N·Cl2H2O，熔点205℃（分解），微溶于冷水，较易溶于沸水，其硝酸盐及氢碘酸盐，极难溶于水（冷水约1:2000）。小檗碱的中性硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐在水中溶解度较小，小檗碱的盐类在水中的溶解度：

盐酸小檗碱 1:500

硫酸小檗碱 1:30（酸性盐1:100） 枸橼酸小檗碱 1:125 磷酸小檗碱 1:15

ooNOHOCH3OCH3小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌均有抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用。小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素）已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。

2．小檗胺(Berbamine)

白色或无色结晶，难溶于水，易溶于乙醇中，可溶于乙醚，氯仿、石油醚。

二．实验目的

1．了解小檗碱，小檗胺的结构与性质，掌握提取分离方法。 2．了解小檗碱，小檗胺的鉴识反应及薄层色谱鉴别。 三．实验原理

本实验的提取分离原理是：小檗碱、小檗胺的硫酸盐易溶于水，小檗碱的盐酸盐难溶于水，小檗胺的盐酸盐可溶于水，游离的小檗碱为季胺碱可溶于水，游离的小檗胺是叔胺碱，难溶于水。因此，将植物原料用稀H2SO4溶液浸泡，然后用石灰乳调至pHl2左右，小檗碱游离而溶于水，小檗胺含酚羟基成钙盐也溶于水，粘液质及过量硫酸生成不溶性钙盐而沉淀析出，再加NaCl，并用盐酸调pH8左右时，小檗碱成难溶性的氯化小檗碱而析出，小檗胺游离析出，最后利用氯化小檗碱在热水中溶解度较大的性质与小碱胺分离。

四．实验材料 材料

三棵针粗粉、烧杯（1000mL、100 mL、50 mL）、0.2％H2SO4(V／V)、纱布、石灰乳、8％NaCl(W／V)、浓HCl、乙醇、2％活性炭、5％NaOH、乙醚、浓HNO3、锌粒、浓H2SO4、固体硝酸钠、KMn04、5％HCl、氯仿、甲醇、氨水

仪器

点滴板、1000mL圆底烧瓶、层析柱、试管、梨形分液漏斗、布氏漏斗、精制棉、循环水泵、旋转蒸发器、水浴锅、电吹风

五．实验内容

(一)小檗碱与小檗胺的提取分离

取三棵针粗粉100克，置1000毫升三角瓶内，加700毫升0.2％(V／V)的H2SO4溶液浸泡24小时，纱布过滤，再用400毫升酸水同法提取一次，合并两次滤液于搪瓷缸内，搅拌下加人石灰乳至pH至l2，静置30分钟，抽滤，滤液中加入计算量(8％W／V)的NaCl，静置，待沉淀完全后，滴加浓HCl至PH至8～8.5，于80℃热水中保温半小时，静置，抽滤，所得沉淀于60℃以下干燥，称重，置100毫升烧杯中，加入30倍量蒸馏水，加热至沸，趁热抽滤，滤液内含小檗碱，沉淀为小檗胺的粗品。

(二)精制：趁热向上述滤液中滴加浓盐酸，调pH至2，静置氯化小檗碱沉淀析出，抽滤，60℃以上干燥，称重，计算得率(不得低于0.2％)

上步所得沉淀，60℃以下干燥，称重，置50毫升烧杯中，加20倍量乙醇加热溶解，加入2％活性炭，再加热煮沸5分钟，热过滤，滤液蒸除乙醇，剩l／4量，冷却，滴加蒸馏水至不再析出沉淀为止，用5％NaOH调pH至8—8.5，80℃水浴加热5分钟左右，放置，抽滤，干燥，再以10倍量乙醚溶解，过滤，回收乙醚，得白色小檗胺。

(三)鉴识

1．小檗碱的鉴识

(1)取氯化小檗碱水溶液数滴，加浓HNO3 1滴，观察现象，再滴加浓HNO3观察有何变化?解释现象。

(2)取氯化小檗碱水溶液数滴，加锌粒少许，再加浓H2SO4数滴，观察现象并解释。 (3)取氯化小檗碱水溶液数滴；加5％NaOH 2～3滴，再加丙酮数滴，观察现象并解释。 2．小檗胺的定性

(1)取小檗胺结晶少量，置白瓷板上，加5％HC1滴使溶解再加固体硝酸钠使之饱和，移入毛细管中观察。

(2)取l～2粒KMn04置白瓷板上，加5％HCl数滴使溶解，再加少量小檗胺结晶，观察颜色变化。

(四)薄层色谱

层析板：硅胶G板，110℃，活化半小时。 展开剂：氯仿—甲醇—氨水(15:4:0.5) 样品：氯化小檗碱乙醇液 氯化小檗碱标准品液 小檗胺乙醇液 小檗胺标准品液

显色：碘蒸汽或改良磺化铋钾 六．实验说明及注意事项： 1．用硫酸浸泡时，硫酸的浓度以0.2％为宜，此时生成的硫酸小檗碱在水中溶解度较大，若加入过量，小檗碱就形成酸式硫酸盐，水中溶解度就降低(1:100)，影响小檗碱的提取量。

2．冷浸时间不宜过长，次数也不宜过多，否则浸出的杂质量也相对增加，冷浸一般24小时可浸出92％的成分,所以浸出两次即可。

3．在pH至8～8.5时小檗胺沉淀较完全，但不易凝聚，故80℃保温，使凝聚而沉降。 4．小檗碱精制时调pH至2，是为了使小檗胺等叔胺型生物碱留在溶液中除去，以便得到较纯的小檗碱，操作时若溶液己冷却析出结晶，就应加热成澄明溶液再用盐酸调pH至2。