内容发布更新时间 : 2024/5/4 17:52:02星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

2～3滴于冰制冷载玻片上，并吹散细胞，将载片在酒精灯上微烤，再用电吹风将标本吹干

8． 染色 滴Giemsa染液6～8滴于载片上，室温下染色8分钟左右，自来水冲洗，用电吹风吹干或自然干燥。

小白鼠骨髓细胞染色体标本的观察

（一） 将制好的玻片标本放于低倍镜下，观察Giemsa染色之后的中期分裂相的形态。 （二） 选择分散适度不重叠染色体的分裂相，在油镜下进行观察。(图10-1)

图10-1小白鼠骨髓细胞中期染色体及核型（雌性）

（三）观察小鼠染色体的端着丝粒的特征，识别着丝粒、染色单体、染色体，计算2n的染色体数目，寻找两性之间在核型上的差别。正常情况下，常规染色时雄性小鼠有3个最短的染色体（1对19号和1个Y染色体），而雌性小鼠只有两个最短的染色体。 （四）作业

观察一张已染色的骨髓细胞染色体标本片。

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实验十一 人类性别鉴定和遗传性状的检查

一、 目的：

1. 了解人类性别鉴定方法。

2. 熟悉人类间期细胞核中性染色质的形态特征和所在部位。 3. 初步掌握X染色质标本的制作方法

4． 通过对人类部分性状的调查分析，了解其遗传方式、基因频率和基因型频率。 5． 巩固和加深对所学的常见遗传病的认识。 6． 掌握常见遗传病的遗传特点及发病机理。

二、 材料、试剂：

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PTC溶液(1/24000;1/50000;1/400000;1/75000;1/3000000)

甲醇冰醋酸(3∶1)固定液。

三、

1． X染色质标本的制作和观察。

2． 正常女性血涂片嗜中性粒细胞分叶核鼓槌的观察。 3． PTC尝味试验。

4． 人类部分遗传性状的调查。 3． 观看电教片：《遗传病》

人类性染色质及性别鉴定

人类性染色质是间期细胞中性染色体呈异染色质部分的特殊结构。人类性别鉴定方法，除通过性染色体鉴别外，另外，还可通过间期体细胞核内的X染色质、Y染色质和嗜中性粒细胞分叶核上的鼓槌进行鉴别。 (一) X染色质标本的制作和观察 1. 实验原理

人类正常女性个体在体细胞中有两条X染色体，但其中的一条X染色体在间期细胞中失去活性，形成一个卵圆形的X小体即X染色质，紧靠核膜的内缘。而正常男性只有一条X染色体，这条X染色体在间期细胞始终要保持活性，故无X染色质形成。通过检测间期细胞中X染色质既可用于性别的鉴定，也可用于临床性染色体病的诊断。 2． 人口腔黏

取清洁牙签轻刮口腔颊部内侧黏膜，将刮起物均匀涂抹在载片上(涂片时，只能从左至右或右至左，切勿来回涂抹)，范围约一张盖片大小。然后，将已制好的涂片滴甲醇冰醋酸固定液1～2滴，约15分钟，空气干燥。然后，加改良苯酚品红染液1～2滴，染色约5分钟，吸去多余染料。镜检。

图11-1正常女性口腔黏膜上皮细胞(示X染色质)

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3．

将已制好的玻片标本置于低倍镜(10×)下观察，找到分散良好，且无重叠的细胞，转高倍镜(40×)观察。X染色质通常紧贴于核膜内缘，形态为一结构紧密、且染色较深轮廓清晰的小体，直径约为1μm，呈圆形、三角形或卵圆形 (图11-1)。在正常女性的口腔黏膜上皮细胞中，其出现率为17％～45％。

观察时应特别注意，凡位于细胞核中间，或核中间与核膜内缘同时出现的类似X染色质的结构，均有可能是其他核质凝聚物，故不能认为是X染色质。交换观察男、女同学的X染色质的制片，并比较男性、女性的X染色质的制片观察结果。 (二) 鼓槌的观察

鼓槌为女性嗜中性粒细胞分叶核上特有的圆球形突起物，直径约为1.5μm，有一细丝柄与分叶核相连，形似鼓槌。在正常女性嗜中性粒细胞中，鼓槌的出现为1.5～6%，而正常男性无鼓槌出现。用低倍镜(10×)观察已制好的女性血涂片标本，找到嗜中性粒细胞分叶核后，换高倍镜(40×)进一步观察(图11-2)。

图11-2正常女性嗜中性粒细胞（箭头所指为鼓槌）

(三) Y染色质的制作和观察 1． 实验原理

正常男性个体间期细胞中有一条Y染色体，当用荧光染料染色时，就可看到在细胞核内有一大小约0.3μm的强荧光小体，称为Y染色质或Y小体。正常男性口腔上皮细胞的Y染色质检查阳性率为80%，正常男性胎儿羊水细胞的Y染色质检查阳性率为20%～70%。故通过检测间期细胞中Y染色质也可用于性别的鉴定和临床性染色体病的诊断。 2． 制片

用消毒牙签刮取男性口腔黏膜上皮细胞，制成临时涂片标本。在涂片标本上滴加甲醇冰醋酸固定液1～2滴，固定30～50min。室温干燥后，用0.5%盐酸喹吖因染料染色5～10min,流水冲洗约3min。再用PH值6.0的磷酸缓冲液分色约5min后，滴入适量的缓冲液，加盖盖玻片，并用吸水纸吸去多余的缓冲液，再用指甲油或石蜡油将盖玻片周围封固，平放暗处约30min后，即可镜检观察。制作Y染色质标本的材料，还可用血液细胞、羊水细胞、精子细胞及发根毛囊细胞等。 3． 观察

将制作好的玻片标本用荧光显微镜观察，先在低倍镜下找到分散较好的细胞，然后转换高倍镜观察。若在细胞核近中心处见有一个发亮的小点，其直径约为0.5μm，这便是Y染色质（图11-3）。一般认为，这一发亮的荧光小点是来自Y染色体长臂异染色质荧光区。所以，在正常男性的间期细胞中可见一个Y染色质荧光点。由于口腔黏膜上皮细胞涂片内易混入细菌或其他荧光物质的干扰，故容易造成假阳性，因此要注意仔细鉴别。

在男性的口腔黏膜上皮细胞中，其Y染色质的出现率为78%左右。Y染色质代表一条Y染色体，因此二者的数目相等。由于正常女性的间期细胞内无Y染色质，所以Y染色质检测也可用于临床核性别的诊断。

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图11-3 正常男性口腔黏膜上皮细胞（示Y染色质）

人类部分性状的遗传学检查

（一）实验原理

人类的各种性状都是由特定的基因控制形成的。由于每个人的遗传基础不同，某一特殊的性状在不同的人体会出现不同的表现。通过一个特定人群的某一性状的调查，将调查材料进行整理分析，可以初步了解某性状的遗传方式、控制性状基因的性质，并能计算出该基因的频率。

（二）PTC尝味试验

苯硫脲（phenythiocamide,简称PTC）是一种人工合成化合物，为白色结晶状药物，由于含有硫酸胺基 (N-C=S)，故有苦涩味（对人无毒也无其他副作用）。人类对苯硫脲的尝味能力，属于不完全显性遗传，不同的人对苯硫脲溶液的苦味有不同的尝味能力。这种尝味能力是由一对等位基因（T、t）所决定的遗传性状，其中T对t为不完全显性。

正常尝味者的基因型为TT，能尝出1/750000—1/6000000mol/L的PTC溶液的苦味；具有Tt基因型的人尝味能力较低，只能尝出1/48000—1/380000mol/L的PTC溶液的苦味；而基因型为tt的人只能尝出1/24000mol/L以上浓度PTC溶液的苦味。个别人甚至对PTC的结晶也尝不出苦味来，这一类个体在遗传学上称为PTC味盲。 1． 溶液配制

称取PTC结晶1.3g，加蒸馏水1000ml，置室温下1～2天即可完全溶解。其间应不断摇晃以加快溶解过程。由此配成的溶液浓度为1/750mol/L，称为厚液。再由此厚液倍比稀释而制成各种浓度的溶液：1/24000；1/48000；1/380000；1/750000；1/3000000，并按顺序排列于实验台上。 2． 具体操作：

（1） 让受试者坐于椅子上，仰头张口。

（2） 用吸管依次吸取少量各浓度PTC溶液（1～5号），滴1～2滴在受试者的舌根部进行尝味，直至有明显苦涩味反应为止。

（3） 记录能尝出的浓度，估计自己属于哪种基因型，个人将自己的基因型报告给指导教师，统计测试结果。组织实验室同学分析测试结果。 3． 尝味记录表

PTC溶液编号

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PTC溶液浓度 1/24000mol/L 1/48000mol/L

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味觉

基因型