内容发布更新时间 : 2024/12/27 15:54:12星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

食品企业的微生物检验实验室操作要求

一.无菌操作要求

1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。

食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原 因：

一是防止试验操作中人为污染样品；

二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。

2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒

后使用。

3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。

4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使

用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。

5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及

试管或平皿边。

6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都

要通过火焰消毒。

7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核

菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。

8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

二.无菌间使用要求

1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及

推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。

2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物 品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在

1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管 每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。

三.消毒灭菌要求

微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。

（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法

1. 灭菌前准备

（1） 所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面

通气孔打开。

（2） 装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。

2. 装放

（1） 干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。

（2） 大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。

3. 设备检查

（1） 检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。

（2） 检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与

温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。

（3） 对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要

求。

4. 灭菌处理 (1) 干热灭菌法：

此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品 等的灭菌。

①器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。

②灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。

③菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排除灭菌器中的冷空气，温度升至160℃调节 指示灯，维持1.5–2h。

④灭菌完毕后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。

(2) 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：

①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更 换）；

②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使 用）；

③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放 了冷气（水沸腾后排气10-15min）；

④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）； ⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃ 后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零， 温度降到60℃以下 再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破；

(3) 卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：

①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。②夹层达到预 定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。 ③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至

④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器 爆破。

⑤使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，以便按 要求程序自动进行灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说 明书进行。

5. 灭菌温度与时间

(1) 干热灭菌器灭菌温度160℃，1.5-2h。

(2) 压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间

（二）间歇灭菌方法

1. 灭菌方法系：

利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此法灭菌。

（1） 将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。

（2） 关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒10～20min。

（3） 灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入37℃温箱过夜，次日仍按上述方法消毒，如

此三次，即可达到灭菌目的。

2. 血清凝固器使用方法:

培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到 灭菌目的：

(1) 在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用。(2)将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后，接上电源，升温75～90℃1h灭菌，放37℃温箱过夜，再如此灭菌三 次。

3. 煮沸消毒：

可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮5～15 min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60min均可达到灭菌目的，但选用煮沸消毒的增消剂时，应注意对物品的腐蚀性。

4. 灭菌处理:

灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染；

(1) 物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用；

(2) 取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用；

(3) 培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃；

(4) 启闭式容器，在取出时应将筛孔关闭；

(5) 取出的物品掉落在地或误放不洁这处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用；

(6) 取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放；

(7) 凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限；

(8) 每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。