内容发布更新时间 : 2024/11/19 3:38:49星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

附件3 PMSC实验所需试剂

试剂名称 L-DMEM/F12 澳洲胎牛血清 PBS(不含钙镁) Penicillin-Streptomycin 0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red 品牌 Gibco 包装 10L 参考价格 (RMB) 727 4888 60 240 178 3114 2500 649 2907 755 购买数量 1 1 6 1 1 1 1 1 1 1 总价 备注 Corning 500mL Corning 500mL Gibco 100mL Gibco 100mL Gibco Gibco 胶原酶Ⅱ bFGF 羟乙基淀粉 Essential 8? Medium Vitronectin (VTN-N) 1g 10ug 阿拉丁 250g Gibco 500mL Gibco 1mL 来自丁香客：

组织贴壁法

材料准备：无菌生理盐水或PBS，手术剪，虎齿镊，组织剪 步骤：

(1)．从含有1‰双抗的无菌生理盐水中取出新生儿脐带，用生理盐水漂洗若干次，直至洗净血渍。血管变形处以及开口两端，弃去不要。

(2)．用组织镊剥弃脐带皮和血管（2条动脉、1条静脉，沿着静脉剪开，再把静脉内膜小心撕出，动脉则直接用镊子使劲拉出），留下内膜，内膜即为华通氏胶（Whalton’s Jelly），放入生理盐水中洗涤2-3次。

(3). 将组织块剪成1.5mm左右大小，将其均匀铺于T75培养瓶中。

(4). 将铺好组织块的培养瓶小心翻转，使其铺有组织块的底面朝上，然后加入约8mL完全培养基。

(5). 隔天轻轻将培养瓶翻转，使培养基微微浸泡到组织块。

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(6). 培养15天后，用培养基或PBS吹打并收集培养皿中依旧贴壁的组织块，以300g速度离心5min后，去上清。再将沉淀的组织块铺于T75培养瓶中，在底部加入约8mL完全培养基。

(7). 隔天轻轻将培养瓶翻转，使培养基微微浸泡到组织块。 (8). 再过7天后观察细胞爬出情况，此时爬出的细胞记为P0。

(9). 收集培养皿中的组织块，以300g的速度，离心5min后，去上清，再将其铺于T75培养瓶中。并在底部加入约8mL培养基。

(10).收集爬出的细胞，以8000-10000/cm2的密度重新接种至培养皿中，并记为P1，待P1细胞长至80%融合时，即可传代。

(11).重复(7)-(10)步骤5-6次。每次爬出的细胞都为P0。按照步骤(10)的方法传代细胞。

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