内容发布更新时间 : 2024/5/7 10:16:59星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

4.2.5 土壤酶活性的测定

脲酶活性的测定采用奈氏比色法．以1 g干土24 h生成的NH3- N量为脲酶的1个活性单位[41]．过氧化氢酶活性的测定采用高锰酸钾滴定法．酶活性以1 g干土1 h内消耗的0．1 mol·L-1KMn04体积数(以ml计)表示[42]多酚氧化酶活性的测定采用邻苯三酚比色法，以1 g干土3 h内生成的没食子素的量为多酚氧化酶的1个活性单位[43]，脱氢酶活性的测定采用三苯基四氮唑氯化物作为氢受体。被还原后生成红色的甲臜，用比色法测定，以1 g干土6h生成的甲臜质量为脱氢酶的1个活性单位[44]。

1. 脲酶活性的测定——苯酚钠比色法 （1） 标准曲线的绘制

吸取稀释的氮的标准溶液1，4，7，10，13，16，19mL，移入50mL容量瓶中，然后加蒸馏水至20mL。再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。根据光密度值与溶液浓度绘制标准曲线。 绘制的标准曲线如图4-1所示：

图4-1

脲酶标准曲线 （2） 操作步骤

取5g风干土，置于50mL三角瓶中，加1mL甲苯。15min后加10mL10%尿素液和20mL PH6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。过滤

后取3mL滤液注入50mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。

脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。 2. 过氧化氢酶活性的测定——高锰酸钾滴定法 （1） 操作步骤

取5g土壤样品于100mL三角瓶中（用不加入土样的作空白对照），加0.5mL甲苯，摇匀，于4℃冰箱中放置30min。取出，立刻加入25mL冰箱储存的

3%H2O2水溶液，充分混匀后，再置于4℃冰箱中放置1h。取出，迅速加入冰箱储存的2mol/L H2SO425mL，摇匀，过滤。取1mL滤液，用0.05mol/L的KMnO4滴定。

（2） 计算

根据对照和样品的滴定差，求出相当于分解的H2O2的量所消耗的KMnO4。酶活性以每g干土1h内消耗的0.1mol/L KMnO4体积数（以mL计）表示。 3. 脱氢酶活性的测定——三苯基四氮唑氯化物（TTC）还原法 （1）方法原理

脱氢酶能酶促脱氢反应，它起着氢的中间传递体的作用。在土壤中，碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，它们可以作为氢的供体。脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。用三苯基四氮唑氯化物作为氢的受体，进行比色测定，以溶液的光密度值表示酶活性。

（2）TPF标准曲线的绘制

于干净20mL具塞试管中，依次加入2mL0.5mol/LTris-HCL缓冲液（pH=7.6）、2mL蒸馏水和2mL不同浓度的TTC标准溶液，然后加入0.1g低亚硫酸钠（保险粉），振荡摇匀。待充分显色后，加入5mL甲苯，振荡萃取TPF，上清液于485nm处测定吸光度值。以TPF的浓度为横坐标，以OD485值为纵坐标绘制标准曲线。

绘制的标准曲线如图4-2所示：

图4-2

TPF标准曲线 （3）操作步骤

称取5g土壤样品，置于干净具塞试管中，每支试管加入2mL1%的TTC溶液，2mL蒸馏水，充分混匀。置于37℃条件下避光培养6h。培养结束后，加入5mL甲醇，剧烈振荡1min，然后静置5min，再振荡20s，然后静置5min。将具塞试管中的物质全部过滤到比色管中，并用少量甲醇洗涤具塞试管2~3次，洗涤液也全部过滤到比色管中，定容到25mL，于485nm下测定吸光度值OD485，以每g干土6h生成的TPF为脱氢酶的一个活性单位。

4. 多酚氧化酶活性的测定——邻苯三酚比色法 （1）标准曲线的绘制

取重铬酸钾标准溶液，用0.5mol/LHCl稀释成各种不同浓度。定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。

绘制的标准曲线如图4-3所示：