内容发布更新时间 : 2024/9/20 4:10:51星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

1 目的

依据《EZAN.FFPE DNA KIT D3399-01》使用说明书及实际使用情况制定标准操作规程，确保正确、安全操作。2 适用范围

适用于石蜡切片中DNA提取的规范操作。3 职责

实验操作人员负责本程序的进行，实验室负责人负责该程序的监控。

4 标准操作程序

4.1实验前准备

4.1.1 55-60°C水浴；70°C水浴。

4.1.2. OB蛋白酶加入1.5ml Protease Storage Buffer溶解后，分装保存于-20℃。

4.1.3. DNA Wash Buffer中加入80ml无水乙醇，并于室温保存。

4.2实验操作

4.2.1 刮取切片上组织部分的样品至1.5ml离心管，加入1ml二甲苯，剧烈涡旋10s 混匀。

4.2.2 10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。

4.2.3 加入1ml 无水乙醇涡旋混匀，10,000×g离心2min，小心吸掉上清(不要吸到切片)。4.2.4 打开盖子放置15min或直到乙醇挥发。

4.2.5 加入200μL Buffer T1和20μL OB蛋白酶。

4.2.6 55℃水浴3h或至组织消化，每隔20-30min混匀一次。如果有需要也可消化过夜。

4.2.7 90℃处理60min。

4.2.8 室温静置10-30min，室温10,000×g离心5min去除杂质，小心转移上清至一新1.5ml离心管中。

4.2.9 加入220ul Buffer BL涡旋混匀。

4.2.10 加入250ul的无水乙醇，高速涡旋15秒混匀。

4.2.11 转移混合液至套有收集管HiBind DNA柱子中，室温下8,000×g离心1 min，弃去滤液。

4.2.12 把柱子装在收集管，加入500ul HB Buffer，室温下8,000×g 离心1min，弃去滤液。

4.2.13 把柱子装在新收集管，加入500ul DNA Wash Buffer，室温8,000×g离心1min。

注意：浓缩的DNA Wash Buffer在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释。

4.2.14 弃去滤液，重复步骤4.2.13一次。倒弃滤液后将柱子重新套回收集管，10,000×g离心3min。

4.2.15 把柱子装在干净的1.5ml离心管上，加入20-100 μL 70℃ 预热的Elution Buffer到柱子基质上(所加的量取决于预期终产物浓度，一般30~50 μL)，室温下静置3min后，室温10,000xg离心1min以洗脱DNA，保留含DNA的洗脱液。

5注意事项

5.1该实验操作时，室内温度应在20℃以上，如果温度过低，请打开空调。

5.2最小洗脱体积为30 μL。

5.3若缓冲液中有沉淀，可在56℃水浴中重新溶解。

5.4 所有的样品使用前请平衡到室温(15–25)℃ 。

5.5 第一次使用试剂盒时，请按照试剂瓶上的提示在DNA Wash Buffer中添加无水乙醇。