内容发布更新时间 : 2024/12/23 19:41:15星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

XX学院 课程实验报告

姓名 专业 班级 成绩 日期 第 次实验 同组姓名 指导教师

实验名称 实验一 质粒DNA的提取及定性定量分析

一， 实验目的

通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术与方法。 二， 实验原理

碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA之间在拓扑学上的差异而达到分离目的。在PH介于12.0~12,5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而变性，而共价闭合环状质粒DNA的氢键会断裂，但两条互补链彼此相互缠绕，仍会紧密结合在一起，当加入PH4.8的乙酸甲高盐缓冲液恢复PH至中性时，共价闭合的环状质粒DNA的复性迅速而准确，而线性染色体的DNA因两条互补链已完全分开，复性就没这么迅速准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与大分子的RNA、蛋白质—SDS复合物等一起，沉淀下来而被除去。

三， 实验器材

小指管、台式离心机、漩涡振荡器、大肠杆菌、冰、溶液I、溶液II、溶液III.、酚：氯仿：异戊醇、氯仿：异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、TE缓冲液 等 四， 实验步骤

1、 将过夜培养的大肠杆菌菌液加入1.5ml小指管中，4000r／min离心1min，

吸去培养液，将所有菌体细胞收集到一个小指管中。

2、 加入100微升溶液I于含菌体细胞的小指管中，漩涡震荡将细胞沉淀悬浮，

室温放置10min.

3、 加入200微升溶液II（新鲜配制），轻轻混匀内容物，1min之内加入150

微升溶液III（冰上预冷），盖紧管口，轻轻混匀数次，冰上放置15min让质粒DNA复性（千万不可以用漩涡振荡器）。

4、 12000r／min离心10min，将上清液转至令一1.5ml小指管中。 5、 向上清中加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25:24:1去蛋白质和脂质），漩涡

混匀后，冰上放置10min，12000r／min离心10min，将上清液转至令一1.5ml小指管中。

6、 向上清液加入2倍体积无水乙醇，漩涡混匀后，冰上放置10min，12000r

／min离心10min，吸去上清液。

7、 用1ml 70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀一次，12000r／min离心5min，吸去

上清液，空气中干燥。

8、 加入20微升TE缓冲液，使质粒DNA完全溶解，--20℃保存，待下一实验

使用。

五， 实验结果及分析

实验中，步骤2加入溶液I后现象无明显变化，而步骤3加入溶液II、溶液III后则出现白色絮状物质，步骤6加入无水乙醇后则沉淀出DNA。