内容发布更新时间 : 2024/11/10 4:54:58星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
无菌线测试（S2－S11）
S1：设备出厂前作的验证，在设备生产厂家内部进行。 S2：评估COP/SOP对无菌区的清洁和杀菌效能验证。 S3：包装材料外表面灭菌消毒效果测试。 S4：包装材料内表面灭菌消毒效果测试。 S5：注入无菌环境测试。
S6：整个生产线的无菌效果验证，认证从灭菌到无菌缸到充填及旋盖的全部过程。 S7：注入封盖系统的无菌环境验证，认证从灭菌到充填及旋盖的整个过程的无菌效果。
S8：隔离系统的抗污染能力验证。
S9：运输测试，测试运输期间，对微生物敏感的产品在分类卡车上，贮存和装卸条件下对包装完善方面的影响。
S10：饮料生产允许测试，确认无菌线是有能力对不同类型的饮料产品进行大批量的生产。
S11：饮料生产接受测试，证明无菌生产线是具备商业长期产生不同饮料的能力的。 无菌线S2验证SOP
目的：评估COP/SOP对无菌区的清洁和杀菌效能
应用：无菌灌注系统无菌区的设备外部表面，此钢片测试应于培养基注入测试之前进行
第一部分：准备工作
1. 仪器与试剂：移液枪（1ml，0.1ml，0.01ml，推荐另配一把1-9ml）以及枪头各100个，钢片50片（Krones提供接种好的钢片），100ml塑料圆盒50个，不锈钢托盘3个，锡箔纸5卷，平皿（塑料/玻璃均可），TSA培养基，PCA培养基，
石英砂、3M胶带、扎带，针筒（1ml，10ml各一个），振荡器1台，摇床（采购中），Duran瓶，或者三角瓶以制备培养基以及无菌水，
2. 洗脱液配制：吐温 0.1% 、蛋白胨0.1%、石英砂稍许、氯化钠0.85% 3. 其它：酒精灯、过滤膜、试管 第二部分：操作要求
1. S2验证都应当在穿着无菌服，手套，进行全身杀菌的条件下进行
2. 将样品按照验证程序要求，进行相应的处理，完毕后采用无菌取样的方式移出，进行微生物检验。
3. 操作前，按照要求进行洗手、更衣、消毒等人员卫生程序。 4. 不相关的人员严禁进入净化间，避免人为污染的存在。 5. 所用工具事先完成消毒处理。
6. 操作过程中产生的废弃包装物、废弃样品和防护用品等物品及时销毁，并对相关操作区域和接触过的区域进行彻底消毒处理。
7. 凡是使接触或可能接触过菌种的地方都要进行消毒，尤其是生产车间内的灌装间，凡是接触过菌种的设备，工具，仪器表面必须进行高温灭菌或者相对应的处理
8. 接种室的准备：一房间作为接种室，内部有恒温设施，温度计，湿度计，生石灰（作为干燥剂），桌，椅各一张。出入此房间人员必须严格控制或者指定专人房间保管钥匙 第三部分：S2验证步骤 1．
设备进行CIP和SIP，SIP时用温度测试条对微生物实验室中的杀菌锅，灌
注UHT系统SIP温度，UHT保持管末端温度进行验证 2．
着色试验，确定S2验证中所挂钢片的位置
3． 4．
挂钢片之前，由Krones人员做阳性对照试验，10组
无菌钢片安置（协助Krones人员做）：钢片使用塑料扎带或者双面胶，悬
挂或黏贴在之前通过着色实验确认的30个点上。安置钢片时，可由三人进行操作，一人在无菌环境内安置，其余两人则协助钢片安置人，比如为其用酒精消毒，穿戴鞋套，递送工具等。钢片安置完毕之后，关闭灌装机各个密封门，并且确认。之后，进行COP/SOP，并且期间有相关人员对于Hygiene Center上的参数，与灌装间COP/SOP的实际时间进行确认。关于COP/SOP参数，需事先从Ecolab取得，后依照此数据，在Hygiene Center核对，并且通过秒表记数验证数据准确性，确认方法亦从Ecolab得到。（需设记录实验的表格） 5．
无菌钢片卸载（协助Krones做）：COP/SOP结束后，卸载钢片，可由三人
进行操作，一人在无菌环境内安置，其余两人则协助钢片安置人，比如为其用酒精消毒，穿戴鞋套，递送工具等。钢片背部以及边缘，需使用酒精或者PAA稀释等消毒液进行消毒，但是消毒液绝对不允许接触钢片正面，消毒完毕后，用9ml无菌水冲洗，并立即放入100ml洗脱液的塑料盒中，上下摇晃20分钟。 6．
洗脱液膜过滤（微生物品控员做）：洗脱液塑料盒摇晃20分钟后，置于超
净工作台上取出，直接对洗脱液进行膜过滤，如产生泡沫，使用100ml无菌水加入滤杯助滤，取下滤膜，放入事先准备好的培养基平板（事先倾倒好TSA无菌培养基）。实验后，平皿放入35-38℃培养箱，48小时后计数 第四部分：S2验证过程中无菌流体的取样
从S2开始至结束，工厂品控人员需依据取样频率，进行微生物取样。要求现场微生物QC取样，取样后进行膜过滤，以总菌以及霉菌/酵母温度培养。 1． 2．
无菌水总出水口
V401，V165，V825无菌空气
3． 4．
COP/SOP时化学中心无菌空气 COP/SOP时化学中心无菌水
第五部分：用差值法计算每片浓度为6 log的钢片所减少的微生物的数量级： R = log (C0) – log (Ct), 即：
R=数量级缩减量或者数量级毁灭量， C0 =初试微生物数量和 Ct =灭菌后微生物存活数量
无菌区钢片测试可接受运行结果参考标准（COP/SOP）： 通过 5 log Spore test strip <1 带菌钢片 6 log细菌量 测试钢片 至少杀灭每条带菌钢片上所含的５log微生物 ≥ 1 片带菌钢片，被杀灭微生物量小于５log 未通过 ≥1带菌钢片 无菌线S3验证SOP
目的：验证系统对包装材料外部表面消毒灭菌效果。
应用：瓶，盖必须与即将投入生产线生产的瓶，盖设计形状，尺寸相一致 第一部分：准备工作
1. 微生物品控准备工作：移液枪（1ml，0.1ml，0.01ml，推荐另配一把1-9ml）以及灭菌过的枪头各100个，细菌悬浊液，菌液浓度确认后，将原液和108 浓度的菌悬液冷藏待用，
装有洗脱液100ml的塑料圆盒198个（121℃ 20分钟
灭菌），无菌浇好TSA培养基的小平皿250套左右，和样品数量相当的0.45um的无菌滤膜，无菌针筒（1ml，10ml各一个），
2. 洗脱液配比：吐温 0.1% 、蛋白胨0.1%、石英砂稍许、氯化钠0.85% 3. 小圆盒上用标签识别5个组和阳性对照
4. 采样点所需物品准备无菌空气采样管、无菌空气取样器、无菌水取样器等，注
意：除了正常采样数量，还必须增加化学中心的无菌空气和无菌水 5. 至少2L无菌水（用于过滤冲洗）
6. 无菌9ml稀释液，数量根据阳性对照数量确定
7. 75%酒精，35-38℃的培养箱，取塑料袋放入紫外灯下杀菌后备用。酒精消毒不锈钢托盘备用3个，锡箔纸5卷，口罩若干，塑料手套若干，摇床，振荡器 8. 准备接种用PET瓶至少600个（包括阳性对照、阴性对照、在实验过程中掉落损失）
9. 强力剪刀1把，不锈钢剪刀2把 ，镊子2把，纸箱30个，
10. 1500ppm PAA 2L（以1L烧杯/塑料杯盛放，保证能覆盖到整把剪刀以及镊子上沿），标签纸（根据样品个数准备） 11. 确认现场的PAA浓度符合要求 第二部分：操作要求
1. S3验证都应当在穿着无菌服，手套，进行全身杀菌的条件下进行
2. 将样品按照验证程序要求，进行相应的处理，完毕后采用无菌取样的方式移出，进行微生物检验。
3. 操作前，按照要求进行洗手、更衣、消毒等人员卫生程序。 4. 不相关的人员严禁进入净化间，避免人为污染的存在。 5. 所用工具事先完成消毒处理。
6. 操作过程中产生的废弃包装物、废弃样品和防护用品等物品及时销毁，并对相关操作区域和接触过的区域进行彻底消毒处理。
7. 凡是使接触或可能接触过菌种的地方都要进行消毒，尤其是生产车间内的灌装间，凡是接触过菌种的设备，工具，仪器表面必须进行高温灭菌或者相对应的处理