内容发布更新时间 : 2024/5/4 6:58:18星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
关于微生物的鉴定
革兰氏染色 初步分类
? 非苛养菌鉴定
苛养菌鉴定 ? 真菌的鉴定 革兰氏染色
? [原理]革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说。
? [标本处理]1.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。 ? 2.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm
离心10min.，取沉渣涂片染色。
+-+-? [报告方式]：革兰氏染色：检出G球菌 ；G球菌 ;检出G杆菌 ；G性杆菌
革兰氏染色
? [注意事项]
? 1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 ? 2．玻片通过火焰温度不能太高。
? 3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不在出现紫色为止。
? [临床意义]通过革兰氏染色，将细菌分初步为革兰氏阳性和革兰氏阴性，便于临床治疗 细菌的初步分类
? 1、 细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株的单菌落进行初步的鉴定。如果混有杂菌，应该重新转种分纯。
+--+
? 2、 染色与镜检： 首先通过革兰氏染色确定基本的分类：（1）G球菌（2）G球菌（3）G杆菌（4）G杆菌。此外，如果镜
下发现革兰氏染色阳性、椭圆形、有芽孢状的较大菌体，可能是真菌。
? 临床标本中分离出较多的是G-杆菌中的肠杆菌、非发酵菌和G+球菌中的葡萄球菌、链球菌、肠球菌。G-球菌中的奈瑟氏菌
亦常分离出，尤其在泌尿生殖系统标本中常见。 细菌的初步分类
1.触酶试验 主要用于G+球菌的分类。葡萄球菌属：触酶（+）链球菌属及肠球菌：触酶（-）
2.氧化发酵试验（O-F试验） 根据细菌在无氧环境中能否利用碳源将细菌分为非发酵菌（氧化型或产碱型）和发酵菌（兼性
厌氧菌）。G（-）杆菌中的肠杆菌O-F试验阳性，非发酵菌O-F试验阴性
3.氧化酶试验 主要用于G-杆菌的分类。肠杆菌的氧化酶（-），非发酵菌多数氧化酶（+），但嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌
的氧化酶（-）。 非苛养菌的鉴定
主要有G+球菌、G+杆菌、G-球菌和G-杆菌
? 这些细菌培养的条件不苛刻，这也是标本分离常见的细菌
? 苛养菌的鉴定也相对比较简单，只要根据初步的分类，遵循其鉴定的途径，就可以做出完整的鉴定结果 G+球菌的鉴定途径
? 1.首先根据菌落特点和革兰氏染色判断是否为G+球菌。 ? 2.根据触酶结果判断为葡萄球菌or链球菌（肠球菌） ? （+） 葡萄球菌
+C
? 菌落特点和G染色G触酶（—） 链球菌和肠球菌 葡萄球菌的鉴定
? 1.对于葡萄球菌的鉴定首先根据G染色和触酶实验确定
? 2.根据菌落特点、是否溶血及特点，初步判断是否需要做Co+：金黄色葡萄球菌 ? Co实验—：其他葡萄球菌 系列生化结果判断葡萄球菌到种 NOTE：对于所有葡萄球菌都要判断其是否为MRS，以指导临床用药。 链球菌的鉴定
首先根据G染色和触酶结果确定为链球菌，然后再根据细菌的溶血情况和菌落特点判断鉴定途径
+C
G触酶（—） 溶血性
α溶血 β溶血 γ溶血
Optochin 杆菌肽 cAMP 胆七 胆七 R S S S S + --
胆七 肺链 A群链球菌 B群链球菌 D群链球菌 D群链球菌 草绿色 6.5%NaCl
-- + 非肠球菌 肠球菌
肠球菌的鉴定
? 根据G染色和触酶初步判断，再据生化和药敏结果鉴定到种 ? G+C、触酶- 胆七、高盐+ ? 氨苄西林敏感实验
? S R ? 粪肠球菌 屎肠球菌
+b
需氧G的鉴定
? 根据G和抗酸染色（A）将其分为： ? A+：分支杆菌、奴卡氏菌
? A- ：李斯特菌属，芽胞杆菌属、棒状杆菌属、乳酸杆菌属、 丹毒丝菌属等
+b
需氧G的鉴定
? 各属间鉴定，通过触酶和动力试验加以初步确定
1、触酶（+）：
? 动力（+）：李斯特菌属，芽胞杆菌属（大）
动力（- ）：棒状杆菌属 2、触酶（-）：
? 动力（+）：乳酸杆菌属（少）
动力（--）：乳酸杆菌属，丹毒丝菌属
+b
需氧G的鉴定 ? 各属间鉴定，根据一些染色（G、A等）特点可初步判断
+
? 1.棒状杆菌属 ：G杆菌、菌体细长、无芽胞、无鞭毛、多形性、菌体染色不同，有异染颗粒 ? 2.产单核细胞李斯特菌 ：4°C可生长 、有狭窄?溶血与链球菌区别：触酶（+） ? 3.红斑丹毒丝菌 ：无鞭毛，无芽胞，无荚膜 、分解Glu乳糖 、H2S（+） ? 4： 乳酸杆菌 ：触酶（-）、动力（-）、磺胺药物R 青霉素S ? 5：其他芽孢杆菌：注意这些细菌均有芽孢
+b
需氧G的鉴定
? 分枝杆菌属：营养要求高，一般生长缓慢 、有耐酸性，抗酸染色 。
? 奴卡氏菌 ：G+丝状，部分抗酸 ，有菌丝体 、菌落粗颗粒状，边缘陷入培养基，表面干燥。灰白或淡黄色 、溶菌酶： + + -C
G球菌
? G-C的致病菌主要有：奈瑟氏球菌和布拉汉氏菌， ? G均为双球菌，其氧化酶和触酶都为阳性
? 1：奈瑟氏球菌：营养要求比较高而且适宜温度为35°C ，硝还阴性 ? 2：布拉汉氏菌：营养要求不高，在18-42 °C 均可生长，硝还阳性。 G-杆菌的鉴定
? G-杆菌为临床分离最多的细菌、其鉴定也相对成熟，目前有多种鉴定方法
? 1. 首先要根据G染色确定为G-杆菌，G-杆菌在Mac上能够生长（注意肠球菌在该培养基上也生长），一般它们对培养条件
要求都较低
? 2. 个别细菌可以通过菌落特点判断，如Pae、Kpn等 G-杆菌的鉴定程序
G染色 G-b OF实验和氧化酶实验
OF（± ）（-） OF（+）（+） OF（+）（+） ox（+） ox（-） ox（+）
非发酵型细菌 肠杆菌科 弧菌科
NOTE：对非发酵细菌中，不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌，其OX均为阴性 G-杆菌的鉴定
? 1.对于肠杆菌科细菌一般都要求判断是否产ESBL（Ｅxtended Spectrumβ-lactamasses)
? 2.G-杆菌药敏结果可以帮助验证细菌鉴定的准确性，如奇异变形杆菌对于四环素、沙雷氏菌对于头孢唑林、嗜麦芽窄食单
胞菌对泰能具有天然耐药性
? 3.对于肠杆菌科的细菌，有的需要做血清学实验，如志贺氏和沙门氏的鉴定 苛养菌的鉴定
? 1.苛养菌主要是指营养要求高，培养条件比较苛刻，不容易培养。
? 2.苛养菌在临床上涉及到的主要有：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、奈瑟氏菌、布拉汉氏菌、军团菌等
? 3. 有一些特殊的实验可帮助苛养菌的鉴定，一些选择性培养基可帮助细菌的鉴定。
苛养菌的鉴定
? 嗜血杆菌的鉴定：
? 1.该菌只能在营养条件高的巧克力平板上生长，菌落为圆形、无色、透明
? 2.该菌生长需要X、V因子，因此利用卫星实验就可以帮助鉴定（副流感只需V因子，杜克氏只需X因子） ? 3.该菌的药敏实验为HTM平板 苛养菌的鉴定
? 肺炎链球菌的鉴定
? 1.该菌呈矛头状、成双排列，菌落为草绿色溶血，脐窝状 ? 2.该菌通过optochin敏感实验得到鉴定
? 3.该菌的药敏实验平板为血平板，放CO2环境 真菌的鉴定
? 分类鉴定原则
? 1:是否具有有性生殖过程，能否形成子囊孢子,具有掷孢子或冬孢子,以及孢子的形状,特点,数目以及能否形成真假菌丝分
类到纲,目,科.
? 2:根据菌落形态,细胞形状,增殖方式是否形成真假菌丝,结合少数糖类发酵和硝酸盐利用等试验分类归属. ? 3:根据生理特征,其中糖的发酵和同化试验最为重要,利用硝酸盐分类到种. 真菌的鉴定
? 1.真菌可以通过沙包氏培养基选择性培养
? 2.可以通过水片在较暗的视野下观看，G染色为G+，菌体较大 ? 3.通过芽管实验鉴定出Cal，该菌占真菌分离的80%以上 ? 4.CSF标本通过印度墨汁染色可以初步判断为新隐球菌 ? 5.其他真菌可通过生化实验鉴定到种 ? 6.曲霉菌（丝状菌）的鉴定 厌氧菌的鉴定
? 1.培养：建立一个无02 环境
? 2. 分离方法：非选择培养基，要求降低氧化一还原电势 。eg:L一半胱氨酸，硫乙醇酸钠 。美兰监测厌氧袋是否漏氧 ：
美兰 ：兰色or无色 ——无氧；变红，有氧，重新使用 ? 3.耐氧实验初步鉴定厌氧菌。 ? 4.染色注意有无芽胞 ? 5.厌氧菌的鉴定