内容发布更新时间 : 2024/10/1 4:21:22星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库 《动物微生物与免疫技术》

任务一 水中菌落总数的测定

目的与要求

掌握生活饮用水菌落总数测定方法，掌握水源水菌落总数的测定方法，判定水被细菌污染的程度和水的卫生质量。

仪器与材料

无菌工作台、干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、放大镜或菌落计数器、冰箱、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶、酒精灯、天平、电炉、试管、试管架、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、无菌生理盐水、载玻片、显微镜等。

方法与步骤

1.菌落总数测定

（1）样品的稀释与接种

生活饮用水：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到46℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃士1℃ 培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1 ml中的菌落总数。

水源水：以无菌操作方法吸取lml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀制成1 : 10稀释液。

吸取1 : 10的稀释液1ml注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀制成l ：10稀释液。按同法依次稀释成l : 1000 , l : 10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。

用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内，以下操作同生活饮用水的检验步骤。 （2）菌落计数及报告方法

作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算。

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若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。

（3）不同稀释度的选择及报告方法

首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符

合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）。

若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）；若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表l中实例3）；若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表l中实例4）。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例5 )。

若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表l中实例6）。

若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例7）。

若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。

如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数．乘以皿底面积63.6cm2，再乘其稀释倍数作报告。

菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（见表1“报告方式”栏）

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表1 稀释度选择及菌落总数报告方式

实例 1 2 3 4 5 6 7

不同稀释度的平均菌落数 10-1 1365 2760 2890 150 多不可计 27 多不可计 10-2 164 295 271 30 1650 11 305 10-3 20 46 60 8 513 5 12 两个稀释度菌落数之比 --- 1.6 2.2 2 --- --- --- 菌落总数报告方式/(CFU/mL) /(CFU/mL) 16400 37750 27100 1500 513000 270 30500 16000 38000 27000 1500 510000 270 31000