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基于信息熵赋权法的正交试验优化七味蟾参方提取工艺研究

作者：邢增智 李帅 张爱军 来源：《中国药房》2019年第03期

中图分类号 R284.2；R932；R944.6 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）03-0376-05 DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.03.19

摘 要 目的：优化七味蟾参方的水提取工艺。方法：采用紫外法测定壁虎和西洋参中的多糖含量，高效液相色谱（HPLC）法测定喜树果中喜树碱、西洋参中人参皂苷Rb1的含量；以上述3种成分的提取率及干膏得率、HPLC指纹图谱相似度作为评价指标，通过信息熵赋权法确定各指标权重而计算综合评分；以煎煮时间、加水量、煎煮次数为因素，设计L9（34）正交试验筛选七味蟾参方的最优提取工艺并进行验证试验。结果：最优提取工艺为药材加10倍量水，煎煮3次，每次煎煮1.0 h。验证试验结果显示，在3次提取试验中，多糖、喜树碱、人参皂苷Rb1平均提取率分别为74.306%、13.860%、52.958%，干膏平均得率为16.150%，指纹图谱相似度平均值为0.991，各指标RSD均小于3.0%（n=3）。结论：优化后的提取工艺重复性好、稳定可行，为该处方的后续开发和产业化生产提供参考依据。

关键词 七味蟾参方；信息熵赋权法；正交试验；多糖；喜树碱；人参皂苷Rb1；指纹图谱；相似度；提取工艺

ABSTRACT OBJECTIVE： To optimize the water extraction technology of Qiwei chanshen formula. METHODS： The content of polysaccharides from Gekko japonicus and Panax

quinquefolium was determined by UV spectrophotometry， the contents of camptothecin from

Camptotheca acuminata and ginsenoside Rb1 from P. quinquefolium were determined by HPLC. The extraction rate of above three components， dry extractum yield and HPLC fingerprint similarity were used as evaluation indicators； information entropy theory was used to determine the weight of each indicator so as to calculate comprehensive score. L9（34） orthogonal test was used to screen the optimal extraction technology of Qiwei chanshen formula with decoction time， water volume and decoction times as factors. Validation test was also performed. RESULTS： The optimal extraction technology included 10-fold water， decocting for 3 times， 1.0 h each time. The results of validation test showed that the average extraction rate of polysaccharide， camptothecin and ginsenoside Rb1 were 74.306%， 13.860% and 52.958%， respectively. The average dry extractum yield was 16.150%， the average value of fingerprint similarity was 0.991 （all RSDs

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KEYWORDS Qiwei chanshen formula； Information entropy theory； Orthogonal test； Polysaccharide； Camptothecin； Ginsenoside Rb1； Fingerprint； Similarity； Extraction technology

七味蟾參方为四川省中医药科学院附属医院肿瘤专科的经验方，是在原有院内制剂处方的基础上进一步优化组成，以增强其化瘀止痛效果为目的而拟定的。该方由壁虎、喜树果、西洋参等药味组方而成，具有消癥解毒、益气活血、化瘀止痛的功效，临床主要协同治疗胃癌及其他消化道肿瘤证属血瘀者。该方在临床上用于进展期胃癌化疗后的协同治疗已经过十余年的临床实践，治疗效果确切（有关临床研究效果的资料正在整理中，将另文发表）。七味蟾参方通常以水煎汤剂的形式应用于临床，因患者服用前需先进行煎煮，故而对患者用药依从性造成一定的不便。为了提高患者用药依从性，同时使药物便于保存和携带，拟将该方全方以临床应用形式即水提取后将其开发成固体制剂，因此参考文献[1-2]中正交设计方法拟对七味蟾参方水提取过程中加水量、煎煮次数、煎煮时间等影响因素进行考察，从而优选出该方的提取工艺。在试验中，选取七味蟾参方中君药及臣药的主要药效成分喜树碱（喜树果）、人参皂苷Rb1（西洋参）、多糖（壁虎和西洋参）的提取率以及干膏得率和高效液相色谱（HPLC）指纹图谱相似度作为评价指标，基于信息熵赋权法对各指标成分赋权分析，进而得出各正交试验的综合评分，以期通过正交试验优选出七味蟾参方最优水提工艺，为该方后续固体制剂的开发及产业化生产提供依据。 1 材料 1.1 仪器

1260 HPLC仪（美国Agilent公司）；UV-2401 PC紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；JY 5002电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；XS 205电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；RE-52AA 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；ST16R高速冷冻离心机（美国赛默飞公司） ；KQ-300B型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。 1.2 药品与试剂

壁虎（山东产，山东康源堂中药饮片股份有限公司，批号：20171101）；喜树果（四川产，四川利民中药饮片有限责任公司，批号：170301）；西洋参饮片（吉林产，四川利民中药饮片有限责任公司，批号：171001）；喜树碱（批号：100532-200401，供含量测定用）、人参皂苷Rb1（批号：110704-201726，纯度：91.1%）、D-无水葡萄糖（批号：110833-201205，纯度：99.5%）对照品均购自中国食品药品检定研究院；水为纯水，乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 供试品溶液的制备

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称取七味蟾参方一剂处方量药材约125 g，按加水煎煮，水浴加热浓缩，60 ℃减压干燥得干膏约21 g，置于干燥器中保存备用。

2.1.1 多糖含量测定供试品溶液的制备 参考文献[3-4]方法，精密称取“2.1”项下的干膏约0.25 g，精密加水50 mL，超声40 min（功率：300 W，频率：40 kHz）使溶解，取适量离心（5 000 r/min，5 min）；精密取上清液1 mL，加水定容至10 mL，即得供试品溶液。 2.1.2 喜树碱、人参皂苷Rb1含量测定供试品溶液的制备 参考文献[5-6]方法，精密称取“2.1”项下的干膏约0.8 g，加入50 mL甲醇超声（功率：300 W，频率：40 kHz）处理40 min，过滤；滤液减压浓缩，用甲醇定容至10 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即得。

2.2 对照品溶液的制备

2.2.1 D-无水葡萄糖对照品溶液制备 精密称取D-无水葡萄糖对照品11.4 mg，置于100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含0.114 mg的D-无水葡萄糖对照品溶液。 2.2.2 喜树碱、人参皂苷Rb1对照品溶液制备 分别精密称定喜树碱、人参皂苷Rb1适量，加甲醇溶解，制成浓度分别为1.334、1.056 mg/mL的对照品溶液。 2.3 蒽酮-硫酸溶液的制备

称取蒽酮0.1 g，加入浓硫酸100 mL，至蒽酮全部溶解，摇匀，即得。 2.4 多糖含量测定

2.4.1 标准曲线的制备 参考文献[3]中多糖含量测定方法，精密量取“2.2.1”项下D-无水葡萄糖对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置于20 mL具塞试管中，分别加水至2.0 mL，摇匀，再加入蒽酮-硫酸溶液6 mL，在旋涡混合器上使其充分混合，放冷至室温。以第一支为空白试剂，在620 nm波长处测其吸光度。以吸光度为纵坐标（y）、质量浓度为横坐标（x），进行线性回归，得回归方程为：y=9.717 1x+0.022 5（r=0.999 7），结果表明，葡萄糖检测质量浓度线性范围为5.70～79.80 μg/mL。

2.4.2 精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下所制D-无水葡萄糖对照品溶液适量，按“2.4.1”项下方法测定吸光度，连续测5次，计算得吸光度的RSD=0.4%（n=5），表明仪器精密度良好。 2.4.3 重复性试验 精密称取同一供试品约0.5 g，平行称定6份，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，并按“2.4.1”项下方法测定吸光度，计算得其RSD=2.88%（n=6），表明该方法重复性良好。