内容发布更新时间 : 2024/12/23 22:08:28星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
（一）渗蜡的概念及方法： 让包埋剂透入整个组织的过程。 方法： 人工渗蜡
准备四个较小的铝盒（医用煮针头的盒子），用纸板隔成许多小格，分别倒入已融化的石蜡，铝盒上标明“透明剂/石蜡”，“石蜡I”，“石蜡II”和“石蜡III”字样。 自动脱水处理机渗蜡 （二）渗蜡操作： 系列石蜡：
过渡：（1/2石蜡/ 1/2正丁醇， 12h）
石蜡Ⅰ（6h）、石蜡Ⅱ（12h）和石蜡Ⅲ（24h）
先在“透明剂/石蜡”盒中每格加入一定量透明剂，以淹没材料为宜，小心将透明后的材料连同标签一起放入每格中，盖上盖子，在一定温度的温箱中放置过夜（12小时以上），然后依次入石蜡I、II和III，每步时间视材料大小和透明剂类型而定，一般可在蜡II过度（在蜡II以后打开盖子）。由于一些固定剂固定的材料在浸蜡过程中仍在收缩，所以，浸蜡应做到时间短而浸透充分。 （三）包埋的操作： 包埋用纸盒的准备。 （四）包埋注意事项：
（1）弄清要切取的表面，使其朝下，并呈垂直状态。
（2）防止气泡产生和材料与周围蜡块分离，这就要求掌握好包埋的温度及操作熟练而迅速。
（3）一般在包埋时，把盛有材料的“石蜡III”取出放在台面上，其正上方置一100W钨丝灯炮，距盆面约10cm，同时旁边点燃一酒精灯，用一烧热的镊子赶走倒入纸盒的石蜡中的气泡。
（五）蜡块的修整切割： 切块 固定 修块 五 作业
11
1 简述材料包埋的操作过程及注意事项。 2 渗蜡不充分的材料对切片会有什么影响？ 3 包埋好的蜡块怎样进行修块？为什么？
第四部分 切片、贴片和烤片
一 实验原理
切片是把包埋好的材料用切片机切成所需要的厚度的切片带。贴片是用粘贴剂把切片平铺在载玻片上，以便于染色。 二 实验目的
掌握石蜡切片的操作规范及注意事项； 三 实验仪器、材料和试剂
石蜡切片机、毛笔、恒温水浴锅、粘贴剂、恒温箱； 包埋后的材料； 载玻片。 四 实验过程
（一）切片的准备工作 蜡块的进一步修整切割 （二）切片的一般步骤 1、蜡块的固着与修整 2、磨刀（自动磨刀） 3、装刀 以5-8o为宜
4、切片 旋转切片和滑走切片
5、检查切片：是否切得正，细胞变形情况，组织拉碎情况等。 （三）载玻片的处理： 载玻片和盖玻片的清洗
新的载玻片和盖玻片在酸酒精（95%的酒精中加几滴浓盐酸）中浸泡2天。旧的载玻片和盖玻片先入铬酸洗液1-2天，取出用洗涤精洗净，再用流水洗净，放于95%酒精中。 铬酸洗液配方：
75%g重铬酸钾+100ml浓硫酸
12
配制：75g重铬酸钾加少量dH2O溶化，再加1000ml浓硫酸，边加边搅拌，并注意冷却。 （四）郝伯特（Haupt）粘贴剂配制：
这是很好的一种粘贴剂，不仅可以粘贴蜡节，同时又可作粘附单细胞藻类或花粉用途，配方：
溶液甲：动物胶（明胶） lg 蒸馏水 100ml 甘油 15g 碳酸（结晶） 2g 溶液乙：甲醛 4ml 蒸馏水 100ml （五）粘片操作：
切片在烤片台上（也可用恒温水溶锅）放置， 40-45℃温度下几分钟，吸去多于的溶液，用解剖针将蜡带排列好，再将温度调至60℃，烤片2—3小时。五 作业
1 石蜡切片过程中，切片不能连成带状和蜡带弯曲的原因是什么？ 2 贴片过程应注意什么？为什么？
第五部分 脱蜡、染色、封固
一 实验原理
细胞和组织之间的不同结构之所以能被染成各种不同颜色，是由于染料对它们所起的物理或化学的综合作用。 物理作用：
渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合。
吸收作用：组织吸收染料中的色素粒子，与之牢固结合，组织着色与染液的颜色相同，
不一定与干燥染料的颜色相同，如品红在干燥状态时为绿色，而其溶液呈红色。组织在染色后也呈现红色，即使组织干燥后，其红颜色仍不变。
吸附作用：染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内，由于分子的引力作用，
色素粒子被吸附而染色。也由于各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的离子。也就是说对离子的吸附有选择性，即有容易被某些物质吸附，有的则不容易被吸附。
化学作用：
生物细胞内含有酸性和碱性物质，分别可与染料中的阳离子和阴离子呼吸结合，这种反
13
应使组织细胞染上颜色。例如，细胞核含酸性物质，易与碱性染料苏木精结合，细胞质为伊红所染。但是嗜碱性和嗜酸性是相对的，若标本在碱性染料液内留置过久，细胞质也可着上碱性染料的颜色。
单独用一种学说解释所有的染色现象都是有困难的。染色的机制相当复杂，目前了解得不很清楚。目前比较明确地认为，染色主要是由于物理作用与化学作用综合发生作用的结果。 封藏的原理：封藏是使已透明的材料，保存在适合折光率的封藏剂中，（如封藏剂加拿大树胶的折光率为1.52，它与玻璃的折光率1.51很接近），使材料能在显微镜下清晰的显示出来并能长期保存。 二 实验目的
通过教学要求学生掌握材料的染色和封藏的原理；掌握染色和封藏的操作规范； 了解常用染色剂的种类及其应用。 三 实验仪器、材料和试剂 染色缸；镊子； 烘干后的切片；
1%的番红50%酒精溶液、5%固绿95%酒精溶液。 四 实验过程
（一）番红-固绿对染法：
二甲苯Ⅰ(5 min) 二甲苯Ⅱ(5 min) 1/2二甲苯 / 1/2无水乙醇(3 min) 无水乙醇(2 min) 95%乙醇(2 min) 85%乙醇(2 min) 70%乙醇(2 min) 50%乙醇(2 min) 30%乙醇(2 min) 蒸馏水(2 min)
番红水溶液(2 h以上) 30%乙醇(2 min) 50%乙醇(2 min) 70%乙醇(2 min) 85%乙醇(2 min) 95%乙醇(2 min) 含0.5%固绿的95%乙醇(< 2min) 95%乙醇(2 min) 95%乙醇(2 min) 无水乙醇(2 min)
1/2无水乙醇/ 1/2二甲苯(30 min) 二甲苯Ⅰ(1 h) 二甲苯Ⅱ(6 h以上) 中性树胶封固 风干保存。 （二）蛋白质的细胞化学鉴定染色
二甲苯Ⅰ(5 min) 二甲苯Ⅱ(5 min) 1/2二甲苯 / 1/2无水乙醇(3 min) 无水乙醇(2 min) 95%乙醇(2 min) 85%乙醇(2 min) 70%乙醇(2 min) 50%乙醇(2 min) 30%乙醇(2 min) 蒸馏水(2 min)
2%醋酸(5 min) 汞-溴酚蓝溶液(3 h) 2%醋酸Ⅰ(5 min) 2%醋酸Ⅱ(5 min)
14
2%醋酸Ⅲ(5 min) 正丁醇Ⅰ(2 h) 正丁醇Ⅱ(2 h) 正丁醇Ⅲ(2 h) 1/2正丁醇/1/2二甲苯(30 min) 二甲苯Ⅰ(1 h) 二甲苯Ⅱ(6 h以上) 中性树胶封固 风干保存。 （三）注意事项
1）在染色之前一定要知道染料溶液的性质。染色后常在同样的溶液中洗去多余的染料。 2）在应用酒精溶液时，常常按照它的浓度顺序排列。如果组织，特别是柔弱的组织从水中直接移入纯酒精或70%酒精中，会引起急剧的扩散而使组织损坏。
3）每种染色方法的染色时间是按常用的材料来确定的，仅供参考，实际染色时间应该依照标本的类型，固定液的性质，切片的厚度，木质化程度，核的稠密等状况而定。如果染色时间延长后，将需较长的脱色或分色时间。
4）用酸酒精分化已染色的标本，必须在显微镜下观察进行。褪色后，必须彻底洗净，否则会影响后面的染色，本身也容易褪色。
5）退回的染色法需要用的过染时间较长，在脱色后，将会得到更鲜明的分化。 6）切片复水应逐级进行
7）最好将无水酒精的染色缸口的周缘，涂少量凡士林，以防止空气中的潮气被吸入，否则也会影响完全脱水。 8）染色缸液体淹没载玻片。 3）掌握染色时间。 4）废液回收。 5）切片编号。 6）夹持方法。
根据材料大小选择不同规格的盖玻片；在实验台上放一张洁净的吸收纸，将载玻片从二甲苯中取出后放在吸水纸上（切片面向上），迅速在切片的中央滴一滴树胶，用右手持镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍倾斜使其左侧与封固剂接触，然后在缓慢将盖玻片放下。如果封固胶不足可以用玻璃棒滴一滴树胶从盖玻片边缘补足，如过多可在干燥后用刀片刮去，并用二甲苯拭去残留树胶。 五 作业
1 染色的一般原理是什么？
2 为什么要对切片进行封藏？封藏过程要注意些什么？ 3 每人交封固的玻片2-3张。
15